Quelles sont les normes pour quantifier l'hépatite C?

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Le virus de l'hépatite C est capable de se multiplier dans les cellules sanguines et de provoquer des maladies lymphoprolifératives. Grâce aux multiples mutations, la défense immunitaire du corps s'affaiblit et des génotypes et sous-types du virus apparaissent. Avec la détermination correcte et opportune d'un type particulier, l'efficacité du traitement antiviral dépend. Le risque d'infection est que la maladie est asymptomatique. Seulement 15% des 100 personnes peuvent avoir des nausées et des vomissements, perdre du poids et de la fièvre

Définition du virus de l'hépatite C

Le taux standard d'hépatite C est compris entre 40 et 60 nm, avec pour la plupart des lipides, une atteinte hépatique résultant d'une évolution aiguë ou chronique de la maladie. L'hépatite C, à savoir le virus à ARN de la famille des Togaviridae, est extrêmement persistante, transmise par transfusion sanguine ou par l'utilisation d'objets non stériles, de produits d'hygiène inappropriés, etc. L'analyse quantitative permet d'analyser le sang et d'identifier la structure génétique du virus infecté.

Afin de déterminer l'hépatite C et ses génotypes, une analyse quantitative est effectuée. Selon l'analyseur, il est possible de déterminer trois niveaux d'incidence du virus à ARN.

Les sous-types peuvent produire diverses modifications. La spécificité et la sensibilité de l'analyseur doivent donc être de cent pour cent. En plus de détecter la maladie chez un patient, il est nécessaire de déterminer son degré de gravité. Certains laboratoires ne disposent pas de toutes les données sur le décodage du virus à ARN, une possibilité de réponse faussement positive est possible.

La recherche sur l'hépatite C sera plus précise lors de l'étude de ces indicateurs:

Attirant l'attention sur les résultats de ces indicateurs et l'état général du corps, un résultat est affiché, montrant le degré d'infection, la forme et le nombre de cellules de l'hépatite C dans le sang. Cela contribue au processus de guérison et à l'efficacité du traitement antiviral.

Types d'analyse pour l'hépatite C

Une réaction en chaîne multidimensionnelle (PCR) donne une idée du nombre de particules d'ADN dans les analyses de patients, et identifiera correctement l'agent infectieux.

Des agents causant des maladies infectieuses peuvent apparaître. Une infection du foie, telle que l'hépatite C, peut être traitée à notre époque, lorsqu'elle est détectée à temps. Si un virus est suspecté, une analyse PCR est effectuée.

Étant donné que les symptômes du virus peuvent être masqués pendant longtemps, une personne peut ne pas ressentir l’apparition de la maladie. Mais avec un examen approfondi dans 60 à 70% des cas, l’hépatite C est détectée. La première analyse, dans laquelle il s’agit du test ELISA, est suivie du diagnostic PCR. L'analyse est effectuée à certaines périodes pour déterminer le stade de la maladie et prescrire le traitement approprié. Pour s'en passer, sans appliquer toutes ces procédures, il est possible de se faire vacciner contre l'hépatite.

Analyse qualitative et quantitative

Il existe des analyses qualitatives et quantitatives. L’essence de la première est qu’elle détermine la présence d’une infection dans le sang. Et cela signifie que le virus infecte les cellules hépatiques saines. Lorsque des anticorps anti-hépatite C sont détectés chez un patient, un test qualitatif est immédiatement effectué. Le taux que le résultat devrait donner est «non détecté dans le sang». Lors de la détermination de la concentration d'un virus, il est nécessaire de connaître la sensibilité du système de diagnostic, car les personnes sous traitement antiviral peuvent effectuer l'analyse. Le degré de sensibilité de l'analyseur ne doit pas être inférieur à 50 UI / ml.

Lorsqu'un virus est détecté, une analyse quantitative est effectuée, c'est-à-dire la charge virale, qui détermine la concentration du virus dans le sang et la gravité de la maladie.

L'ARN viral, qui se trouve dans une certaine quantité de sang, est défini comme la norme au taux de 1 ml pour 1 centimètre cube. Après avoir quantifié la charge virale, il est possible de juger du degré d’infection dans un environnement non encore infecté. Dès que la concentration d'hépatite C augmente dans le sang, il est nécessaire de l'isoler de l'environnement.

Dans les premières étapes, il est important de détecter le degré de concentration de l'hépatite afin de déterminer le rythme de la rééducation. Si le taux d'hépatite C est dépassé de plus de 800 000 UI / ml, il est considéré comme trop élevé, avec une augmentation pouvant aller jusqu'à un million - critique. Si la plage quantitative est inférieure à 400 000 UI / ml, il est considéré que l'infection des personnes autour sera moins probable. Cette figure montre clairement que l'hépatite C est présente dans le corps à très faible dose. L’analyse n’ayant pas permis de déterminer la valeur quantitative des particules d’ARN du virus, elle a été renommée plusieurs fois pour un diagnostic précis.

Résultats de l'analyse quantitative

La tâche de déterminer la quantité de charge virale dans le sang d'un patient consiste à identifier le degré d'infection chez les autres.

Les résultats de l'analyse PCR:

  1. Une réponse positive signifie qu'il y a une infection dans le matériel biologique. L'analyse permet de déterminer le nombre exact de cellules infectées.
  2. La réponse négative indique l'absence d'infection, qui est soigneusement recherchée dans le corps.

La méthode de détermination quantitative de l'hépatite C est précise et informative. Elle est réalisée sur un équipement extrêmement sensible. Le déchiffrement des résultats de l'analyse vous permet de savoir si l'infection et ses spécificités, de voir le plus petit nombre de cellules infectées sur des analyseurs très sensibles.

L'analyse donne rarement des résultats faussement positifs ou opposés, ce qui se produit le plus souvent dans les études de dosage immunologique.

Analyse quantitative de la PCR pour l'hépatite C

Il existe de nombreux sous-types de VHC, ce qui explique pourquoi il n'est pas toujours possible de sélectionner des médicaments antiviraux efficaces et d'obtenir les résultats souhaités en matière de traitement. Une variété d'agents pathogènes en raison de leur capacité à changer leur structure, c'est-à-dire à muter. En conséquence, l'immunité n'a pas le temps de former une réponse puissante contre l'agent pathogène et les médicaments sont inefficaces.

L'hépatite est souvent diagnostiquée au stade de la cirrhose, ce qui prédispose à la détection tardive de la maladie en raison de l'absence de signes cliniques. Ce n'est que par des recherches en laboratoire que le VHC peut être détecté pendant la période d'incubation.

Une analyse quantitative de l'hépatite C permet non seulement d'établir la présence de l'agent pathogène dans le sang, mais également de calculer sa concentration.

Recommandations pour préparer l'analyse

Une préparation spécifique pour le diagnostic de laboratoire n'est pas nécessaire. Il suffit d'adhérer aux recommandations suivantes:

  1. l'analyse quantitative est effectuée à jeun, au dernier repas - 8 heures avant le prélèvement de sang;
  2. pendant deux jours, vous devriez abandonner l'alcool et les plats "lourds";
  3. Les médicaments que prend le patient revêtent une importance particulière. Ils peuvent affecter les résultats de l’étude, le médecin doit donc les connaître.

Les exercices lourds et les procédures physiothérapeutiques à la veille du prélèvement sanguin ne sont pas non plus souhaitables. Pour déchiffrer l'analyse quantitative de l'hépatite C s'est avérée fiable, ne négligez pas les recommandations ci-dessus.

Souvent, le patient reçoit le résultat de l'analyse en une journée. Le prix de l'étude visant à déterminer la concentration de l'agent pathogène dans le sang dépend du laboratoire et de la qualité des réactifs et peut atteindre 4 000 roubles.

Diagnostic de laboratoire de l'hépatite C

Parmi les principales méthodes de diagnostic, citons l’analyse ELISA, ou dosage immuno-absorbant lié à une enzyme. Il est prescrit pour la détection d'anticorps spécifiques du VHC. Son efficacité atteint 95%. Si la transcription de l'étude donne un résultat positif, il convient de suspecter la présence de l'agent pathogène dans le sang.

Notez que dans la moitié des sujets avec un test "+" au cours du diagnostic ultérieur, l'agent viral n'est pas détecté dans le sang. ELISA dans ce cas indique un contact reporté avec le VHC dans le passé, comme en témoignent les anticorps circulants.

Une étude plus précise est la réaction en chaîne de la polymérase, ou autrement la PCR. Il vous permet de déterminer la concentration de l'agent pathogène de l'ARN dans le sang. En trouvant un ensemble génétique du virus dans le matériel biologique, le médecin confirme l’hépatite C.

La PCR est attribuée au patient pour vérifier le diagnostic. Il permet d'identifier l'ARN au stade où les anticorps ne sont pas encore disponibles. Il existe plusieurs types d'études génétiques:

  1. analyse quantitative de la PCR pour l'hépatite C, qui non seulement établit la présence de l'agent pathogène dans le sang, mais fournit également des informations sur sa concentration;
  2. qualité - confirme l'infection;
  3. génotypage - vous permet de déterminer le génotype de l'agent pathogène et de sélectionner les médicaments les plus efficaces contre ce dernier.

Réaction en chaîne de la polymérase

Comme déjà mentionné, il existe plusieurs types de tests de laboratoire:

  • l'analyse qualitative indique la présence d'un agent pathogène dans le sang. Ce type de diagnostic a un certain «niveau de réponse», il n’est donc pas toujours fiable. Afin de déchiffrer correctement les résultats et d’obtenir des indicateurs réels, il est recommandé d’utiliser un système de test avec une sensibilité d’au moins 50 UI / ml pour la recherche. Le taux d'analyse est «réponse négative» ou «virus non détecté». Cela indique l'absence d'un ensemble génétique de l'agent pathogène dans le matériel à tester. Si le résultat est positif, un examen plus approfondi du patient est nécessaire.
  • L'analyse quantitative de la PCR pour l'hépatite C détermine la charge virale, c'est-à-dire la concentration de l'agent pathogène dans le sang. Le résultat de l'étude montre le nombre d'unités d'ARN dans un volume fixe de fluide biologique;

La charge virale est le dénombrement de l'ARN infectieux dans un millilitre du sang étudié. Les unités de mesure sont UI / ml; toutefois, certains laboratoires définissent «copies / ml», tout en indiquant la forme de la norme d’analyse permettant la comparaison et l’évaluation des résultats.

  • génotypage. En raison de la capacité de l'agent pathogène à modifier le choix des médicaments antiviraux efficaces, le traitement doit être basé sur son génotype. Cela dépend non seulement du résultat, mais également de la durée du traitement. Ainsi, l'hépatite VHC 1 nécessite la nomination de médicaments pour un an, mais une tendance positive n'est observée que dans 60% des cas. Quant aux deuxième et troisième génotypes, ils sont moins résistants à l'action des médicaments antiviraux, ce qui explique l'efficacité de la thérapie dépasse 85%. À la réception d'un tel résultat de l'étude - "le virus n'est pas typé", il convient de suspecter la présence d'un agent pathogène non reconnu par les systèmes de test standard.

Indications pour l'analyse

Le décodage de l'analyse quantitative de l'hépatite C est nécessaire pour:

  1. examen plus approfondi du patient lorsque des anticorps anti-VHC ont été détectés au cours de la procédure ELISA;
  2. confirmation du diagnostic;
  3. établir la charge virale lors d'une infection mixte, lorsqu'une personne est infectée par plusieurs types d'agents pathogènes;
  4. déterminer les tactiques de traitement (choix des antiviraux, leur remplacement ou l'achèvement du traitement);
  5. évaluer la dynamique de la progression de la maladie, ainsi que l'efficacité des médicaments;
  6. déterminer le stade de la pathologie (aiguë, chronique).

La PCR présente les avantages suivants:

  1. bonne sensibilité, ce qui permet de calculer même une petite quantité du virus;
  2. identification du pathogène lui-même (ARN) et non des antigènes;
  3. la spécificité de la technique - la mise en place d'un certain type d'agent pathogène;
  4. la rapidité d'obtention des résultats, car l'analyse ne nécessite pas la culture de cultures dans un milieu nutritif. La réponse est prête dans 5 heures.
  5. universalité - permet d'identifier l'ensemble génétique de divers agents pathogènes, à la fois ARN et ADN (hépatite B);
  6. détection d'infection latente.

La recherche en laboratoire permet de confirmer le diagnostic et fait partie intégrante d’un examen approfondi (analyse des symptômes cliniques, résultats des tests ELISA et biochimique).

De plus, la PCR est largement utilisée en allergologie, en génétique et pour établir le caractère de paternité.

Décodage de l'analyse quantitative du virus de l'hépatite C

L'évaluation des résultats des diagnostics de laboratoire est réalisée par un médecin en comparant les données obtenues à la norme.

Analyse de déchiffrement de l'hépatite C

Les maladies du foie dans le monde moderne sont très pertinentes, car cet organe est soumis aux influences négatives de l'environnement, à un mode de vie inapproprié, etc.

Mais il existe des maladies auxquelles tout le monde peut être infecté et il est extrêmement difficile de prédire si cela se produira ou non. Ceci, par exemple, l'hépatite virale, qui se transmet principalement par le sang et ne se fait pas connaître au début. Nous parlons en particulier de l'hépatite C.

Le fait que le virus ne présente initialement aucun signe particulier complique sérieusement le diagnostic, mais il existe néanmoins des études assez efficaces et variées qui aideront à cerner le problème.

Le principe de base de la détection de l’infection par le VHC consiste à déchiffrer les tests de dépistage de l’hépatite C, c’est-à-dire à comparer certains indicateurs avec des normes.

Conditions d'obtention d'un itinéraire

Le diagnostic de l'hépatite C est effectué par des personnes pour diverses raisons, principalement:

  • hépatite présumée possible;
  • une personne est à risque;
  • le diagnostic est nécessaire compte tenu des spécificités du travail;
  • les femmes pendant la grossesse ou lors de la planification.

Il existe plusieurs types de diagnostics: certains sont des études superficielles, d'autres sont profonds et extrêmement précis, leur principe étant l'étude des écarts minimaux des indicateurs normaux ou la détection de substances spécifiques.

Pour la détection du virus de l'hépatite C dans le sang humain, 3 types de méthodes de diagnostic sont utilisés, à savoir:

  1. Test immuno-absorbant enzymatique (ELISA). Conduit en laboratoire, le principe repose sur la détermination des anticorps anti-hépatite, notamment: IgG, IgM. Ce diagnostic ne donnera pas de réponse détaillée: une personne est malade ou non, car un tiers des porteurs d'anticorps n'est pas détecté. Cela se produit en raison de l'écart entre l'entrée du virus dans l'organisme et la production d'anticorps dirigés contre lui. Il s'agit donc d'une analyse douteuse et très superficielle.
  2. Analyse d'immunoblot recombinant. Elle est effectuée uniquement pour confirmer les tests de laboratoire. Si le résultat est positif, cela signifie que la personne est ou était porteuse de la maladie. Les anticorps anti-virus ne sont pas affichés immédiatement, même après un traitement réussi de l'hépatite. En outre, un résultat faux est possible en raison de facteurs tiers.
  3. Analyse par polymérase (PCR). Quelle est la méthode la plus précise pour déterminer l'hépatite? - uniquement PCR. C'est le moyen le plus jeune et le plus précis de diagnostiquer. La PCR peut donner une réponse détaillée sur l'évolution de la maladie, vous permet de définir la concentration du virus dans le sang et son génotype (il en existe 6). Le principe repose sur la détection du virus DNR / ARN dans le plasma sanguin. Cette méthode contourne tout ce qui précède en termes de qualité du diagnostic: au moins 20 jours doivent s'écouler avant les manifestations cliniques de l'hépatite et au maximum 120 jours avant la production d'anticorps - 10 à 12 semaines après la pénétration du virus. Mais la détection de l'agent responsable dans le sang ne peut en aucun cas être fausse, la seule restriction: 5 jours doivent s'écouler à partir du moment de l'infection, car il se peut qu'il n'y ait pas encore de virus dans le volume sanguin étudié.

La PCR est réalisée pour un diagnostic précis, il se produit trois sous-espèces:

  1. Analyse qualitative. Avec cela, seule la présence du virus est déterminée.
  2. Diagnostic quantitatif. Utilisé pour déterminer le contenu exact du virus dans le volume sanguin; pendant le traitement est utilisé pour tester l'efficacité.
  3. Diagnostic génotypique. Utilisé pour déterminer le génotype, et plus tard le phénotype du virus. Connaître le génotype de l'agent pathogène est extrêmement important pour la thérapie car, en fonction des caractéristiques, l'évolution et la concentration de l'apport en médicament changent.

Analyses auxiliaires

Dans les méthodes de diagnostic, des tests supplémentaires jouent un rôle important, ce qui parfois modifie complètement les caractéristiques du traitement et peut même parfois indiquer un diagnostic différent.

Analyse biochimique

Afin de prescrire correctement le traitement et de ne pas aggraver l’image, vous devez déterminer de manière fiable le degré de dégradation du foie. Pour cette utilisation, utilisez un test sanguin biochimique qui indiquera des écarts de composition par rapport à la norme.

Les modifications caractérisent les caractéristiques des lésions tissulaires du foie, qu’il s’agisse du stade de la maladie, de la gravité de la fibrose, de la perturbation du foie. La méthode biochimique montrera le nombre réel de bilirubine, de protéines, d'urée, de créatinine, de sucre, d'AST et d'ALT, de phosphatose alcaline, de fer et de gamma-glutamyltranspeptidase dans le sang. De plus, le profil lipidique et la qualité du métabolisme des protéines seront déterminés.

Fibroso-diagnostic

La fibrose est une lésion des tissus du foie, son évolution dépend de son degré. Le diagnostic de la gravité des lésions tissulaires est donc très important. À en juger par l'évolution de la maladie, le médecin peut juger de l'urgence du traitement. Si la situation n'est pas critique, elle peut même être différée pour ne pas nuire aux autres organes avec les médicaments.

Autres analyses

Parfois, pour obtenir une image complète de la maladie, on utilise une échographie de la cavité abdominale et de la thyroïde, une numération globulaire complète. Les personnes âgées sont diagnostiquées avec les systèmes cardiovasculaire et digestif, les poumons.

S'il n'est pas possible d'effectuer des analyses ELISA / PCR standard, des analyses spécifiques sont effectuées: l'analyse de la salive et d'autres liquides pour la présence de l'agent pathogène.

Des indicateurs

Les technologies de diagnostic de l'hépatite C sont à un niveau élevé et, souvent, ne donnent pas de faux résultats.

Malgré cela, il est impossible de fournir une garantie de précision à 100%: des résultats faux positifs sont possibles.

Un test sanguin peut donner une réponse erronée en cas de non-respect des règles d'analyse ou de certains autres facteurs. Les principales raisons de la distorsion des résultats:

  • certaines infections spécifiques qui réagissent avec les agents de dépistage et le test est positif;
  • recherche sur la grossesse;
  • la présence de substances secondaires dans le corps;
  • perturbation du système immunitaire;
  • violation des règles de prélèvement sanguin.

Déchiffrage des tests d'hépatite C

Le décodage des tests d'hépatite est confié à un spécialiste expérimenté qui déterminera les anomalies de chacun des indicateurs et rédigera une conclusion sur la probabilité d'hépatite.

Lors du diagnostic par ELISA, la détection d'anticorps dans le sang indiquera sans équivoque qu'il existe ou existait un virus de l'hépatite dans le corps humain: le patient est maintenant malade ou a la maladie et les antigènes n'ont tout simplement pas eu le temps de sortir du corps. Il faut se rappeler que les anticorps ne fonctionnent pas immédiatement - un certain temps doit s'écouler pour qu'une telle analyse donne des résultats fiables. Par conséquent, si nécessaire, vous devez redonner du sang pour le test.

Si le diagnostic PCR a donné une réponse positive, l'agent pathogène présentait une probabilité de 99% dans le corps. Dans ce cas, il est nécessaire de déterminer la gravité et de procéder au génotypage de l’ARN pour corriger l’évolution, puis de commencer immédiatement le traitement afin que l’hépatite ne devienne pas chronique. Ces tests de polymérase sont considérés comme très précis, car ils peuvent détecter jusqu'à 1 représentant du virus dans la cellule. Si le débit de la réaction en chaîne de la polymérase n'est pas violé, la réponse est négative et il n'y a pas lieu de s'inquiéter.

Lors de l'établissement de l'hépatite C, on utilise un dosage quantitatif des protéines bilirubine, ALT et AST. Leur contenu indique également le degré et la gravité de la maladie.

Tableau général des indicateurs de substances dans le sang pouvant indiquer une hépatite C après analyse biochimique:

Hépatite C. Analyse quantitative. Norm, résultats de la transcription

Hépatite C. Qu'est-ce qui est dangereux pour l'homme? Comment diagnostiquer une infection. Que faut-il pour l'analyse

Virus de l'hépatite C. Quel est le danger Comment l'identifier à temps.

Le virus de l'hépatite C ou VHC est une maladie infectieuse portant une molécule d'acide ribonucléique.

Ce type de virus peut facilement s'adapter aux conditions de l'habitat et se transforme souvent en différentes formes de la maladie. C'est pourquoi notre système de défense du corps est si difficile à gérer. Six principaux types génétiques d’infection et des dizaines de sous-types sont classés. Dans notre région, on trouve souvent les trois premiers types de virus.

Selon les statistiques, seulement un quart des cas d'infection par le VHC se produisent sans complications, dans tous les autres cas, la norme, si l'infection se développe en un processus chronique qui affecte négativement les organes internes. L'hépatite peut donc être compliquée par une fibrose hépatique - le processus de remplacement des cellules du foie. D'autres complications se développent selon une réaction en chaîne: à la suite d'une fibrose, des tumeurs cancéreuses apparaissent et une maladie du foie se transforme en une cirrhose.

Dans la plupart des cas, l'infection pénètre dans le corps humain par les vaisseaux sanguins. Le virus de l'hépatite C est diagnostiqué par plusieurs méthodes. Surveiller le niveau de concentration en anticorps anti-VHC. L’infection n’a pas eu lieu si aucun anticorps n’y avait été trouvé dans le sang du patient. Sinon, le virus est étudié plus en profondeur, effectuez un autre test - PCR. Seule cette méthode permet d’identifier l’ARN du virus une semaine et demie seulement après l’infection, à un moment où le corps n’a pas le temps de produire des anticorps anti-infectieux et où les conséquences de l’infection ne sont nullement reflétées dans l’état général, en particulier dans les résultats d’autres études, telles que l’AC et la biopsie.

Analyse de la PCR pour l'ARN: quantitative et qualitative. Résultats de décodage

Charge virale ou analyse quantitative de la PCR - une analyse visant à déterminer le niveau d'infection dans le plasma. En substance, l'analyse quantitative est le nombre de molécules infectieuses d'acide ribonucléique dans un millilitre de sang.

L'ADN-R est une méthode quantitative rapide, peu coûteuse et non pas la plus précise pour la détermination d'un virus, basée sur la détection de cellules à cellules ramifiées. Ce test peut ne pas identifier les infections présentes dans le corps en raison d'une faible sensibilité - environ 450 UI / ml.

La méthode quantitative de l'amplification de la transcription vous permet de trouver des cellules dans le corps de l'ARN. Cette méthode est apparue relativement récemment, elle est peu coûteuse et constitue un outil de diagnostic assez efficace. La sensibilité du test est d'environ 10 UI / ml.

Essayons d'expliquer les résultats des analyses. Ci-dessous, une table et décodage.

Etude PCR pour l'hépatite C: types, indications, transcription

L'hépatite virale C est une maladie grave qui se manifeste par des lésions du foie. Chez 80% des patients, cela devient chronique. Le virus se multiplie dans les cellules du foie - les hépatocytes - et provoque leur mort. Le tissu mort est remplacé par des foyers de tissu conjonctif, une fibrose se développe.

Au fur et à mesure que la fibrose se développe, le foie est incapable d'exercer ses fonctions, la cirrhose du foie commence, ce qui est dangereux en raison de ses complications: pression accrue dans la veine porte, saignements gastro-intestinaux, insuffisance de la coagulation sanguine, changements mentaux dus à des lésions des noyaux cérébraux.

La cause de la maladie est une infection par un virus de la famille des Flaviviridae, appartenant au type des virus à ARN. Cela signifie que le matériel génétique par lequel les protéines de l'agent pathogène sont synthétisées est codé dans la molécule d'acide ribonucléique. L'infection se produit par le sang, sexuellement et d'une femme enceinte jusqu'au fœtus. Malheureusement, un délai suffisamment long peut s'écouler entre l'infection et le début de la production d'anticorps - de deux semaines à six mois. Cela ne permet pas de déterminer l'infection par la méthode de dosage immunologique et de commencer le traitement à un stade précoce.

Qu'est-ce que l'analyse PCR?

La PCR est une méthode d'analyse moléculaire qui permet de détecter le matériel génétique de l'agent pathogène dès la première semaine après l'infection en utilisant une réaction en chaîne de la polymérase. L'étude a une spécificité et une précision élevées et permet non seulement de déterminer la présence ou l'absence du virus, mais également sa concentration et son génotype.

Pour l'étude, le sang d'un patient est prélevé dans lequel l'ARN du virus peut potentiellement être localisé. Des amorces sont ajoutées aux régions synthétisées artificiellement dans le sang du gène de petite longueur souhaité, et l’ARN polymérase est une enzyme spéciale qui augmente de façon répétée la quantité de matériel génétique de l’agent pathogène. À l'aide d'un appareil spécial, plusieurs cycles de chauffage et de refroidissement sont effectués. Ensuite, le matériel est analysé et comparé aux gènes connus du virus, sur la base desquels une conclusion est formulée à propos de la présence ou de l'absence d'infection.

Types d'analyse PCR pour l'hépatite C

Il existe trois types d'analyse PCR:

  1. Analyse qualitative de la PCR. La première étape de l'étude. Cela vous permet d'identifier le matériel génétique du virus dans le sang.

  • Analyse quantitative de la PCR. Vous permet de déterminer la charge virale - la concentration du matériel génétique de l'agent pathogène dans un millilitre de sang. Cette étude est réalisée avant le début du traitement, puis au cours de la première, quatrième, douzième et (si le cours est long) vingt-quatrième semaine de traitement pour évaluer son efficacité.

  • Génotypage L'agent causal de l'hépatite C mute souvent et rapidement. Sept variantes de ce génotype du virus ont été trouvées sur la planète. En Russie, les premier, deuxième et troisième types sont courants. La résistance au traitement de chacun des génotypes est différente. Par exemple, l'efficacité du traitement du premier type est de soixante pour cent et, pour les deuxième et troisième, elle atteint quatre-vingt-cinq. Par conséquent, afin de sélectionner les médicaments appropriés et de prescrire un traitement d'une durée suffisante, il est nécessaire de déterminer exactement le type de virus avec lequel le patient est infecté.
  • Indications pour l'analyse PCR de l'hépatite C

    L'étude PCR est prescrite dans les cas suivants:

    • contact avec une personne malade au cours de laquelle une infection pourrait survenir;
    • dosage immunoenzymatique positif;
    • signes de cirrhose: modifications de la taille du foie, hypertrophie de la rate, apparition sur l'abdomen du plexus veineux sous-cutané;
    • l'apparition de symptômes de dommages au foie: douleur à l'abdomen droit, jaunissement de la peau;
    • augmentation de l'activité de l'ALT et de l'AST dans l'analyse biochimique du sang;
    • avant de commencer le traitement pour déterminer la charge virale;
    • surveiller l'efficacité du traitement antiviral;
    • après le traitement pour contrôler la rechute;
    • en présence d'hépatite B diagnostiquée, pour exclure les dommages mixtes au foie.

    Explication des études PCR sur l'hépatite C

    Le décodage de l'analyse PCR et du dosage immunoenzymatique de l'hépatite C doit être effectué par un hépatologue ou un spécialiste des maladies infectieuses. L'analyse des résultats de la PCR est nécessaire en combinaison avec les données d'analyse biochimique du sang, de la biopsie et des ultrasons. Seul un médecin qualifié sera en mesure d'analyser les résultats de la recherche et, sur cette base, de prescrire le traitement approprié.

    Décodage de l'analyse qualitative.

    Dans le matériel biologique analysé trouvé le matériel génétique de l'agent pathogène. Infection confirmée.

    L'infection est absente ou la quantité d'ARN de l'agent pathogène est inférieure à la limite de sensibilité.

    Décodage de l'analyse quantitative.

    Taux normal pour les personnes en bonne santé. Cela signifie qu'il n'y a pas d'ARN de l'hépatite C dans le matériel étudié ou que sa concentration est inférieure au seuil de sensibilité de l'étude.

    La concentration en ARN est inférieure à la plage de quantification. Ces résultats sont interprétés très soigneusement, corrélés avec les données d’autres études, souvent ré-étudiées.

    Le niveau de charge virale à une concentration donnée est considéré comme faible. Habituellement, une diminution de la quantité de virus signifie que le traitement est efficace.

    Plus de 8 * 10 ^ 5 UI / ml

    Le niveau de charge virale à une concentration donnée est considéré comme élevé.

    Plus de 2,4 * 10 ^ 7 UI / ml

    La quantité d'ARN au-dessus de la limite supérieure de la plage de quantification. Il est impossible de tirer des conclusions sur le degré de charge virale avec ce résultat. Habituellement, dans de tels cas, le test est répété avec la dilution d'un échantillon de sang.

    Décoder le génotypage.

    ARN détecté d'un génotype spécifique

    Le virus de l'hépatite C d'un certain génotype et sous-type a été détecté dans le biomatériau. Le résultat est codé en chiffres romains et en lettres latines, par exemple - 1a, 2b. Au total, il y a sept génotypes et soixante-sept sous-types, cependant, en Russie, il n'y a que trois premiers types.

    ARN du virus de l'hépatite C détecté

    L'ARN a été trouvé dans le sang d'un génotype rare pour la Russie, qui ne peut être attribué au premier, deuxième ou troisième type. Plus de recherche est nécessaire.

    Ce résultat indique que le patient est en bonne santé ou que la quantité d'ARN de l'agent pathogène est trop petite.

    Il est possible que l'analyse PCR de l'hépatite C soit négative et que le test d'immunosorbant lié à une enzyme reconnaisse les anticorps contre le virus. Cela signifie que le patient a eu l'hépatite C aiguë et a guéri par lui-même. Environ vingt cas d’infection entraînent une guérison spontanée si le corps du patient présente une résistance suffisante à l’infection.

    Bien que la PCR soit une analyse extrêmement précise, ses résultats peuvent être faussés dans les situations suivantes:

    • le sang a été transporté au laboratoire dans des conditions inappropriées, la température a été violée;
    • l'échantillon de biomatériau était contaminé;
    • il y avait des traces résiduelles d'héparine et d'autres anticoagulants dans le sang;
    • Les investigateurs se sont révélés être des inhibiteurs - des substances qui ralentissent ou arrêtent la réaction en chaîne de la polymérase.

    Les avantages de la PCR par rapport aux autres méthodes

    1. Diagnostic dans les premiers stades. La PCR détecte le matériel génétique de l'agent causal. En utilisant l'analyse par immunofluorescence, seules les immunoglobulines peuvent être déterminées - les substances que l'organisme produit en réponse à une infection. En cas d'infection par l'hépatite C, l'intervalle entre l'infection et le début de la réponse immunitaire peut être de plusieurs semaines et plusieurs mois. À ce stade, l'ELISA sera inefficace. La PCR donnera une réponse dans la première semaine après l'infection.

  • Faible probabilité d'erreur. Dans le matériel à l’étude, déterminez l’aire de matériel génétique qui n’est caractéristique que d’un seul type de pathogènes. Cela élimine les faux résultats. Lorsque des erreurs ELISA sont possibles, étant donné que le même type d'anticorps peut être libéré contre différents virus, ces anticorps sont appelés anticorps croisés.

  • Haute sensibilité. La PCR permet de détecter l'ARN de l'agent causal même en quantités minimes. Cela permet d'identifier les infections cachées.
  • Comment se préparer au don de sang pour les études PCR

    Pour l'analyse PCR de l'hépatite C, du sang veineux est collecté. Habituellement, deux portions de sang sont prélevées dans la veine du patient à la fois: la première est envoyée pour la PCR et la seconde par ELISA. Cela a pour but d'évaluer plus précisément le degré d'infection d'un patient par un virus et la manière dont l'immunité lutte contre ce virus.

    Habituellement, le patient est tenu de respecter les règles suivantes:

    • une prise de sang est prise le matin;
    • L'intervalle entre le dernier repas et le don de sang devrait être de huit à dix heures.
    • deux ou trois jours avant l'analyse, il est nécessaire d'abandonner les aliments frits et gras, ainsi que l'alcool;
    • pendant vingt-quatre heures avant l'analyse, le patient doit éviter tout effort physique: ne portez pas de poids, n'allez pas au gymnase ni à la piscine.

    Que montre une analyse quantitative de l'hépatite C?

    Il est assez difficile de diagnostiquer les maladies du foie par des signes externes ou par la douleur.

    Cela est dû à la particularité de l'organe, qui n'a pratiquement pas de terminaison nerveuse et est un patient souffrant de divers maux.

    C'est également le cas des hépatites: au début, elles ne se transmettent pas d'elles-mêmes. La jaunisse peut même se développer, la température augmente et une légère douleur au foie peut être ressentie.

    Afin de poser un diagnostic avec précision et de choisir une méthode de traitement, le médecin peut vous prescrire une variété de tests: des tests sanguins pour les anticorps aux ultrasons du foie.

    Cependant, l’hépatite étant diagnostiquée par le sang, toutes les études supplémentaires visent principalement à comprendre comment le virus a endommagé le foie.

    Lors de la séance, le médecin peut vous prescrire une analyse quantitative de l'hépatite C. Dans cet article, nous analyserons les raisons pour lesquelles il est nommé, ses résultats possibles et leur interprétation. À la fin du document, vous trouverez un prix estimé du don de sang pour analyse.

    Qu'est ce que c'est

    Une telle étude est menée pour comprendre combien de molécules de virus sont dans le corps.

    L'analyse quantitative est un test sanguin pour la présence de l'hépatite. Il montre comment les cellules du corps sont infectées par un virus, que la maladie se développe ou non.

    C'est-à-dire qu'il montre la concentration ou la charge en ARN de l'hépatite C dans le corps humain en unités par millilitre ou par centimètre cube de sang.

    En revanche, l'analyse qualitative permet de déterminer uniquement la présence de l'ARN du virus.

    Dans quels cas?

    L'étude est menée en parallèle avec une analyse qualitative après qu'un test sanguin pour la présence d'anticorps anti-hépatite (ELISA) ait montré un résultat positif. Faites-le plusieurs fois:

    • lors du diagnostic initial de l'hépatite C avant de prendre une décision quant au choix du traitement;
    • pendant le traitement de la maladie (généralement à 1, 4, 12 et 24 semaines) pour déterminer le tableau clinique des résultats du traitement;
    • après le traitement pour déterminer la récidive.

    Importance

    L’analyse quantitative est l’un des principaux types de recherche sur lequel le médecin s’appuie pour choisir les méthodes de traitement de l’hépatite. Il sert à:

    1. Comprendre à quel point le corps est infecté par un virus, la présence quantitative d'antigènes dans le corps.
    2. L'efficacité de la thérapie choisie.
    3. Choisissez une méthode de traitement et faites ses prévisions.

    Cependant, cette analyse ne permet pas de juger du degré d'atteinte hépatique ni de la gravité de la maladie pour le corps. Pour ce faire, utilisez d’autres recherches, par exemple l’analyse biochimique du sang, l’élastométrie, la biopsie et d’autres.

    Méthode et délais

    Le prélèvement sanguin dans une veine a généralement lieu le matin. Grâce à l'utilisation de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR), une telle étude peut être qualifiée de l'une des plus précises dans le domaine de la détection virale.

    Sans utiliser de terminologie scientifique, le processus peut être décrit comme suit: le biomatériau prélevé est mélangé à certaines enzymes qui permettent de copier les enzymes ARN ou ADN du virus. Il en va de même jusqu'à ce que ces molécules soient suffisamment identifiées pour identifier l'agent pathogène.

    La date limite pour la publication des résultats varie en fonction de l’institution médicale et de sa charge de travail. Les résultats peuvent être résumés 4 à 5 heures après le début de l’étude. Par conséquent, le résultat peut être publié le lendemain après le prélèvement sanguin.

    Plus le laboratoire, l'équipement et les réactifs sont modernes, plus les résultats sont précis et rapides.

    Se préparer au don de sang

    La livraison du biomatériau pour l'analyse a lieu à partir d'une veine. Il n'y a pas de recommandations spéciales pour la préparation, par conséquent, les règles standard à suivre avant le don de sang pour une étude sont pertinentes:

    1. Il est préférable de le faire le matin à jeun (le dernier repas ne devrait pas être plus tôt que 8 à 12 heures avant l'accouchement).
    2. Si le sang n'est pas prélevé le matin, vous ne devriez pas manger d'aliments gras au petit-déjeuner (il faut également respecter l'intervalle de 8 à 12 heures).
    3. Refus de l'alcool, des aliments gras et frits 1-2 jours avant l'étude.
    4. Ne venez pas à l'analyse le lendemain du festin des fêtes.
    5. Il est interdit de fumer au moins une heure avant le biomatériau.
    6. Avant de prendre du sang, vous devez vous asseoir en paix pendant 10 à 15 minutes afin de détendre votre corps et d’éliminer les conséquences du stress, tant physique que psychologique.
    7. Si vous prenez des médicaments ou des médicaments similaires, l'analyse peut être effectuée 10 à 14 jours après la dernière dose. (Ce fait doit être signalé au médecin, peut-être qu'il établira une condition différente).
    8. Le biomatériau n'abandonne pas immédiatement après un examen rectal, une radiographie, une kinésithérapie.
    9. Les analyses initiales et répétées s’effectuent mieux dans le même laboratoire (établissement médical), afin qu’elles puissent utiliser des établissements différents pour différents réactifs, équipements, unités de mesure et précision.

    Résultats de décodage

    Selon le niveau de concentration du virus dans le corps, diverses conclusions sont tirées concernant le traitement de la maladie.

    Ensuite, déterminez l'efficacité du traitement. Si, lors d'analyses répétées, la charge virale est inférieure à 8 * 105 UI / ml, on peut alors affirmer que le traitement va dans la bonne direction et que la lutte contre la maladie porte ses fruits.

    On peut parler d'une réponse virologique précoce, à condition que la présence quantitative de l'ARN du virus soit réduite le troisième jour de traitement. Mais la probabilité que cela se situe au niveau de 85%.

    Si, toutefois, l'indicateur est supérieur à 8 * 105 UI / ml, le médecin doit alors revoir le schéma thérapeutique et en choisir un plus approprié. En conséquence, plus le niveau est élevé, plus le virus frappe le corps et plus le pronostic est sombre.

    Dans ce cas, les résultats dans différents laboratoires peuvent être indiqués en UI / ml ou en copies par ml. Le facteur de conversion est différent (plage d'environ 1 à 5) et dépend de la méthode utilisée pour déterminer l'indicateur quantitatif. Il est généralement admis en pratique que 1 UI / ml = 4 copies par ml.

    Y a-t-il des erreurs?

    Malheureusement, le diagnostic peut être erroné. Mais ce n’est que si l’installation médicale utilise un équipement obsolète, des réactifs inappropriés, alors une certaine proportion de résultats incorrects est présente.

    Ces facteurs peuvent également affecter:

    • la présence d'héparine ou d'inhibiteurs dans le sang;
    • contamination par biomatériau au cours de la recherche.

    Avec une préparation adéquate pour l'analyse dans les centres de traitement modernes, cette probabilité est proche de zéro.

    Qui contacter et quel est le coût

    Si vous avez une suspicion d'hépatite, vous devez contacter un virologue, un spécialiste des maladies infectieuses ou un hépatologue. Si nécessaire, ils vous enverront vers d'autres médecins.

    Le prix de telles études peut être différent. En outre, cela dépend des annotations des centres de diagnostic eux-mêmes et de la complexité du travail, des équipements, etc.

    Dans les laboratoires modernes, vous pouvez naviguer entre 2 300 et 3 000 roubles (1 350-1400 UAH) sans avoir à payer le sang prélevé dans une veine. Il existe des cliniques qui proposent d'effectuer une analyse de 300 roubles (environ 140 USD).

    La forme approximative des résultats d'analyse ressemble à ceci.

    Conclusion

    Pour résumer l'article, soulignez les points principaux:

    1. L'analyse quantitative de l'hépatite C s'appelle un test sanguin pour la présence de cellules virales, indiquant sa charge.
    2. L'indicateur est mesuré en unités par millilitre ou par centimètre cube de sang.
    3. L'analyse est effectuée comme dans le diagnostic initial et ensuite pour déterminer l'efficacité du traitement sélectionné ou la détection d'une rechute.
    4. Il ne permet pas de parler du niveau de santé du foie, altéré à la suite d'une infection par le virus de l'hépatite C. Des études connexes peuvent être réalisées: prise de sang biochimique, élastométrie, biopsie, etc.
    5. La plupart des dons de sang ont lieu le matin, biomatériau prélevé dans une veine.
    6. Il est déconseillé de fumer, de boire de l'alcool, des aliments gras ou frits avant de passer le test. Dans le même temps, le respect des règles de préparation de l’étude indiquées dans l’article est le bienvenu.
    7. Si l'analyse a montré que la charge virale dans le plasma sanguin est supérieure à 600 UI / ml, l'infection et le développement de l'hépatite C dans le corps se sont produits.
    8. Dans le cas où des analyses répétées montrent une charge supérieure à 8 * 105 UI / ml, le médecin doit revoir le schéma et les méthodes de traitement. Cela indique le manque d'efficacité de la thérapie sélectionnée.
    9. La probabilité d'erreur dans l'étude quantitative est extrêmement faible. Cependant, la contamination par des biomatériaux, la présence d'inhibiteurs ou d'héparine est possible, ce qui rend l'analyse fausse.
    10. Le seuil inférieur du coût de la procédure est de 300 roubles (sans le prix du prélèvement sanguin) et augmente en fonction des réactifs utilisés, de l'équipement de laboratoire et d'autres facteurs.

    No. 350СВ, Détermination quantitative de l'ARN du virus de l'hépatite C par PCR [charge virale] (charge virale du VHC, ARN du virus de l'hépatite C (test quantitatif)) dans le sérum

    Détermination de l'ARN du virus de l'hépatite C dans le sérum par la méthode de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) avec détection du "temps réel".

    site spécifique de fragments détectables de l'ARN du virus de l'hépatite C; La spécificité de la détermination est de 100%. Sensibilité de détection - 60 UI / ml Gamme linéaire: 10 ^ 2 - 1x10 ^ 8 UI / ml.

    • Test qualitatif positif pour la présence d'ARN du virus de l'hépatite C dans le sérum.
    • Détermination de la charge virale.
    • Déterminer la tactique de traitement des patients.
    • Évaluation précise de l'efficacité du traitement.

    L'interprétation des résultats de la recherche contient des informations pour le médecin traitant et ne constitue pas un diagnostic. Les informations contenues dans cette section ne peuvent pas être utilisées pour l'autodiagnostic et l'autotraitement. Le médecin établit un diagnostic précis, en utilisant à la fois les résultats de cet examen et les informations nécessaires provenant d'autres sources: anamnèse, résultats d'autres examens, etc.

    Unités de mesure: la quantité d'ARN du virus de l'hépatite C, exprimée en UI / ml. Pour la conversion en copie / ml, un ratio de 1 UI = 2,5 copies de l'ARN du virus de l'hépatite C doit être utilisé.

    • Informations générales
    • Exemples de résultats

    * La période spécifiée n'inclut pas le jour de la prise du biomatériau

    Détection PCR en temps réel.

    exemples de résultats sur le formulaire *

    * Nous attirons votre attention sur le fait que lors de la commande de plusieurs études, plusieurs résultats de recherche peuvent être reflétés sur un seul formulaire.

    Dans cette section, vous trouverez le coût total de cette étude dans votre ville, voir la description du test et le tableau d’interprétation des résultats. Choix du lieu de passer l'analyse "Détermination quantitative de l'ARN du virus de l'hépatite C par PCR [charge virale] (charge virale du VHC, ARN du virus de l'hépatite C (test quantitatif)) dans le sérum sanguin" à Moscou et dans d'autres villes russes, n'oubliez pas que le prix de l'analyse, Le coût de la procédure de biomatériau, les méthodes et le moment de la recherche dans les cabinets médicaux régionaux peuvent varier.

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    Analyse quantitative et décodage du VHC

    L'hépatite C est une maladie qui peut se multiplier dans des cellules hépatiques saines et provoquer l'apparition de maladies prolifératives. Dans le monde moderne, lorsque le virus de l'hépatite a subi une certaine mutation, le système immunitaire humain est menacé, car, comparé à une infection, il est négligeable. Il convient également de noter que tous les patients ne connaîtront pas les premiers signes de la maladie, en particulier aux stades précoces.

    L’analyse par l’ARN du virus de l’hépatite C est une étude quantitative dont la norme réside dans la présence modérée de cellules virales dans le sang du patient. Selon les statistiques, environ 31% des patients sont complètement guéris de cette maladie, si elle en est au stade initial.

    Dans la pratique médicale, les médecins notent que 4 millions de symptômes infectés et les premiers signes n'apparaissent pas du tout, bien que la forme négligée de l'hépatite puisse entraîner une cirrhose du foie ou un cancer.

    Actuellement, lors de la procédure de «transfusion sanguine», on vérifie la présence du virus de l'hépatite C dans ce sang, car cette maladie est transmise par le sang du donneur.

    Aujourd'hui, les médicaments contre l'hépatite C sont déjà apparus dans le monde avec une efficacité proche de 100%. L'industrie pharmaceutique moderne a créé des médicaments qui n'ont pratiquement aucun effet secondaire. De nombreux patients obtiennent les premiers résultats en soulageant les symptômes et en réduisant la charge virale après une semaine de consommation. Pour en savoir plus sur les médicaments contre la hépatite issus de la production indienne, lisez notre article séparé.

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    Types d'études PCR

    La PCR (réaction en chaîne de la polymérase) est la méthode la plus moderne et la plus efficace pour étudier le gène du virus et ses capacités. Ces diagnostics sont capables d'établir un type de maladie et de déterminer sa mutation ultérieure dans le corps du patient.

    L'analyse est effectuée en prenant du sang, qui est ensuite placé dans des réactifs spéciaux dans lesquels le clonage de cellules a lieu.

    Il en sort deux d'une cellule, et ainsi de suite. En conséquence, il existe des centaines d’ADN grâce auxquels vous pouvez diagnostiquer le pathogène et identifier le virus à un stade précoce.

    Par conséquent, la PCR est divisée en plusieurs types:

    • analyse qualitative - reconnaît l'infection des gènes dans le sang. Si, au cours de l'analyse qualitative du patient, la maladie est confirmée, une analyse quantitative doit être effectuée pour déterminer l'étendue de l'infection. À la suite de ce diagnostic, les experts écrivent «détecté / non détecté». «Détecté» - indique que la maladie est présente dans le corps et que son ARN a déjà été identifié. «Non détecté» - indique l'absence de gène du virus dans l'échantillon, c'est-à-dire qu'il n'y a pas d'ARN de l'hépatite. Mais les médecins recommandent de refaire le test après 10 jours.
    • analyse quantitative - détermine la quantité de matériel génétique d'infection dans le sang. Un tel diagnostic permet d’établir la gravité de la maladie et l’ensemble des antécédents cliniques. À la suite d’une telle analyse, on ne peut écrire que «positif / négatif / invalide». "Positif" - représente la charge infectieuse. Les médecins prescrivent cette méthode de diagnostic de la maladie pour déterminer l'efficacité du traitement à 4, 12, 16 et 24 semaines de la maladie, si l'indicateur viral se situe dans la plage de 8 x 10 UI / ml, le traitement est efficace; «Négatif» - le gène d'infection n'est pas détecté. "Invalide" - cela se produit si le gène du virus a été détecté de manière qualitative, mais cela n'a pas été révélé lors d'une analyse quantitative. Il en est de même si le volume d’infection est inférieur au niveau.

    Différences dans les analyses qualitatives et quantitatives

    Le virus de l'hépatite C est diagnostiqué principalement en effectuant une analyse quantitative, qui est nécessaire à l'interprétation correcte de la maladie. Malgré cela, les méthodes de diagnostic qualitatif et quantitatif ont leurs différences, par exemple: le rôle et les tâches assignées à la recherche - qualitatif - confirment la présence de l'infection après les anticorps détectés du virus, et quantitatif - une méthode secondaire qui réfute ou confirme la maladie afin d'établir le diagnostic correct et unique..

    Interprétation de la recherche quantitative

    Après le diagnostic, seuls les médecins peuvent interpréter le résultat, car il ne doit pas être montré en chiffres, mais en mots. Selon les statistiques, la PCR quantitative est l'analyse la plus sensible. Pour comprendre si un virus est présent dans l'organisme, il est nécessaire de comprendre et de savoir qu'une analyse quantitative de l'hépatite C est interprétée à l'aide de la désignation numérique (standard) de l'infection:

    Utilisation du diagnostic PCR

    La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) en biologie moléculaire est une méthode expérimentale de détection des virus. Il vous permet d’augmenter considérablement la concentration de certains fragments d’acide nucléique (ADN) dans des échantillons de matériel biologique, ce qui permet de les déterminer (reconnaître) et de les compter.

    L'analyse est effectuée comme suit. Du matériel génétique (un échantillon de sang), qui peut potentiellement inclure le gène souhaité, est introduit dans le tube. Des amorces sont également placées - des segments synthétisés chimiquement d’une petite longueur du gène souhaité.

    Un ADN ou une ARN polymérase est également ajouté dans le vaisseau, ce qui permet d’aligner une chaîne d’acides nucléiques complètement identique à celle de l’origine. La composition résultante est injectée et un ensemble de quatre nucléotides libres - un matériau de construction spécial pour l'ARN ou l'ADN, dont l'un contient des particules de phosphore radioactives.

    Le mélange obtenu est chauffé à 95–96 ° C. C'est pourquoi deux hélices d'ADN, qui sont normalement entrelacées, sont tissées. Ensuite, le médicament est refroidi et les amorces se fixent à la région souhaitée du génome viral, empêchant l’ARN (ou l’ADN) de former à nouveau une double hélice.

    En cours de refroidissement, la polymérase recherche une chaîne de nucléotides libre. Pour le fonctionnement de cette enzyme, une seule chaîne de nucléotides est nécessaire. Comme la polymérase glisse le long de la chaîne d’ADN (comme un anneau sur une corde), elle n’est pas capable de travailler sur une double hélice.

    Ensuite, un cycle de chauffage répété est effectué, ce qui permet de séparer les chaînes de nucléotides. À chacun de ces cycles de PCR, la quantité dans l'échantillon du gène d'hépatite souhaité augmente de manière exponentielle, et le reste du matériel génétique est produit (se développe) de manière linéaire.

    Après purification de la solution à partir des résidus de nucléotides et séparation par électrophorèse des chaînes d'ADN par le paramètre de poids moléculaire, on peut facilement déterminer s'il existe ou non un gène souhaité dans l'échantillon étudié.

    Avantages de la PCR

    Les tests de laboratoire utilisant la PCR permettent d'obtenir encore plus d'informations que la présence de l'ARN du virus. En déterminant le paramètre du niveau de rayonnement radioactif, il est possible d'identifier la quantité de matériel génétique qui était à l'origine contenue dans l'échantillon étudié. Dans le cas de l'hépatite B, déterminez l'indicateur de charge virale

    Un autre avantage de cette méthode est le très haut degré de sensibilité de la réaction CR. Il est beaucoup plus élevé que les méthodes classiques de détection de virus. Idéalement, pour identifier le gène souhaité, pour la PCR, un seul virus dans l'échantillon suffit.

    De plus, la PCR est complètement spécifique. Ses amorces sont conçues de manière à correspondre pleinement aux régions uniques des gènes souhaités qu'aucune autre séquence ne possède. Comme les empreintes digitales sont uniques, il existe des séquences de nucléotides uniques dans chaque gène.

    Analyse qualitative de la PCR

    L'analyse qualitative vous permet d'identifier uniquement la présence d'un virus dans le sang. Ce test doit être effectué chez tous les patients chez qui des anticorps anti-hépatite C ont été détectés dans le sang. Il ne peut en résulter que l'une des deux valeurs suivantes: «détecté» ou «non détecté». Chez une personne en bonne santé, la norme (valeur de référence) doit être "non détectée".

    Il existe une interprétation particulière de ces résultats de la recherche qualitative:

    • Le résultat est "détecté". Cela signifie qu'un fragment d'ARN spécifique au virus de l'hépatite C a été trouvé dans l'échantillon de matériel biologique prélevé analysé. Par conséquent, le patient est infecté par le virus de l'hépatite C. Si le résultat d'une PCR de haute qualité est «détecté», cela indique que le virus se multiplie et à ce moment, il infecte de nouvelles cellules du foie dans le corps.
    • Le résultat est "non détecté". Un tel verdict indique que dans l'échantillon de matériel biologique obtenu dans ce laboratoire et analysé, aucun fragment d'ARN spécifique du virus de l'hépatite C n'a été trouvé, mais que la concentration en ARN de l'infection par l'agent pathogène était inférieure à la limite de sensibilité du test.

    Dans la phase aiguë de l'ARN du virus de l'hépatite C, de telles études qualitatives par la méthode PCR peuvent être détectées dès 1-2 semaines immédiatement après l'infection du corps, c'est-à-dire bien avant l'apparition des anticorps anti-hépatite.

    Des résultats de test inexacts de cette étude peuvent être obtenus par:

    • biomatériau contaminé;
    • la présence d'héparine dans le sang du patient;
    • la présence dans l'échantillon de substances chimiques ou protéiques (inhibiteurs) agissant sur les divers composants de la PCR.

    Pour effectuer une analyse qualitative de la PCR, aucune préparation spéciale du patient pour l’étude n’est requise. Le sang veineux est utilisé comme matériau.

    Evaluation des résultats

    Les tests PCR de haute qualité ont un certain degré de sensibilité et, en fonction de la précision des recherches et du niveau d’équipement du laboratoire, ils peuvent varier de 10 à 500 UI / ml.

    Cela signifie que si le virus dans l'échantillon de sang est présent à une très faible concentration (inférieure à la valeur seuil de la sensibilité de ce laboratoire), le résultat peut alors être déterminé comme "non détecté" chez un patient patient. Pour cette raison, lors de l'analyse qualitative de la PCR avec un faible niveau de virémie (faible concentration de virus), par exemple, pour les patients sous traitement antiviral, il est très important de connaître le seuil de sensibilité de ce système de diagnostic.

    Variantes de systèmes de diagnostic

    Pour contrôler la réponse virologique, il est recommandé d'utiliser des systèmes de diagnostic avec un seuil de sensibilité d'au moins 50 UI / ml pour un traitement antiviral. Ces critères sont satisfaits, par exemple, avec les analyseurs Cobas Ampicolor HCV-Test (exacts à 50 UI / ml), ainsi qu'avec l'ARN RealBest HCV (avec une sensibilité de 15 UI / ml).

    Selon les recommandations de l’OMS, pour établir un diagnostic définitif de l’hépatite C, il est nécessaire de se baser uniquement sur la base d’une triple détection du RNA du virus C dans les échantillons de sérum du patient, en l’absence d’autres variétés de marqueurs de l’hépatite.

    Outre les méthodes de PCR, un test TMA (méthode d'amplification de la transcription) est également utilisé pour détecter l'ARN du VHC chez les patients. Son seuil de sensibilité est optimal (5 à 10 UI / ml), mais dans notre pays une telle méthode de test n’est pas encore très répandue.

    Gamme de modifications de virus détectables

    Une telle détermination qualitative dans le sérum de la présence d'ARN du virus de l'hépatite C permet de déterminer plusieurs génotypes de ce virus. Actuellement, la science connaît plus de six génotypes de ce virus, ainsi que près de 10 sous-types de cette maladie.

    Dans notre pays, les virus communs 1, 2, 3 génotypes. Les laboratoires peuvent détecter les génotypes suivants: 1a et 1b, 2a, 2b et 2c, ainsi que 3, 4, 5a et 6, quels que soient leurs sous-types. Pour toutes les modifications de virus, la spécificité de la détection est de 100%.

    Analyse quantitative par PCR

    À l'aide d'un test PCR quantitatif, on détermine le niveau de concentration du virus de l'hépatite dans des échantillons de sang (charge virale). Ce test de virémie (concentration en virus) vous permet de déterminer le nombre d'unités d'un certain matériel génétique (l'ARN le plus viral), qui est détecté dans une certaine quantité. Dans ce cas, déterminez sa concentration en 1 ml, ce qui correspond à 1 cu. voir

    Les paramètres quantitatifs de l'analyse sont exprimés sous forme de chiffres; à cet effet, les unités internationales (UI) par millilitre (ml), appelées UI / ml, sont utilisées comme unités de mesure. Or, dans certains laboratoires, la quantité de virus peut être déterminée dans d'autres unités: le nombre de copies par ml est indiqué en copies / ml.

    • Dates: pour l’hépatite C, une telle analyse quantitative de la PCR est effectuée immédiatement avant le début du traitement. Puis les 1ère, 4ème, 12ème et 24ème semaines. L'évaluation à la 12e semaine est indicative, elle permet de déterminer l'efficacité du traitement.
    • Préparation à l'analyse. Pour effectuer une analyse quantitative de la PCR, aucune préparation spéciale du patient pour l'étude n'est requise. Une demi-heure avant l'échantillonnage ne devrait pas fumer. Le sang veineux est utilisé comme matériel de laboratoire.

    Evaluation des résultats

    Pour différents systèmes de test de laboratoire, il existe différents facteurs de conversion pour cet indicateur en UI / ml. En moyenne, ils prennent un paramètre de conversion, dans lequel 4 copies / ml = 1 UI / ml. Ainsi, si le laboratoire donne le résultat de l'analyse PCR, 2,4 * 10 6 copies / ml, ce paramètre doit être divisé en 4 et nous obtiendrons 6 * 10 5 UI / ml.

    Une charge de 800 000 UI / ml est considérée comme élevée, ce qui correspond approximativement à 3 000 000 copies / ml. Selon certains auteurs, une faible virémie correspond aux paramètres de la PCR quantitative inférieurs à 400 000 UI / ml.

    À la suite du test quantitatif, les résultats finaux peuvent être fournis non pas sous forme de valeur numérique, mais: «en dessous de la plage de mesure» ou «non détectée».

    • Evaluation: "en dessous de la plage de mesure." Cela suggère que le test quantitatif n'a pas pu détecter l'ARN du virus de l'hépatite C, mais que le virus lui-même est présent dans le corps à de très faibles concentrations. Ceci est mis en évidence par un test qualitatif supplémentaire confirmant la présence du virus.
    • Note: non détecté. Ce résultat indique que le test quantitatif n'a pas été trouvé dans l'échantillon d'ARN du virus.

    Le paramètre de la charge virale, tout d’abord, détermine le degré de contagiosité de la maladie, le niveau de "contagiosité" du patient. Plus la concentration de virus du patient est élevée, plus grande est la probabilité de le transmettre à d’autres personnes. Par exemple, lors d'un rapport sexuel avec une personne malade ou verticalement. Cet indicateur quantitatif permet également de déterminer l'efficacité du traitement du patient.

    Effectuer une analyse quantitative du CCP est important pour la thérapie antivirale, en évaluer le succès et planifier la durée du cours. Ainsi, avec une réponse rapide du corps au traitement et un faible degré de virémie, la durée du traitement peut être raccourcie.

    Si le paramètre de PCR quantitative est lentement réduit, le traitement antiviral doit être prolongé ou modifié. Si le niveau de charge virale est faible, il s'agit d'un facteur favorable au traitement, mais s'il est élevé, la méthode de traitement utilisée est inefficace et les médicaments ou les méthodes d'utilisation doivent être modifiés.


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