Analyse qualitative et quantitative de la PCR pour l'hépatite C: négatif, positif, transcription

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L'hépatite C est une maladie hépatique virale provoquée par le flavivirus HCV (du mot anglais virus de l'hépatite C), dont la structure contient une molécule d'acide ribonucléique (ARN). L'ARN porte le code génétique du virus. Sa présence permet l'analyse de la PCR pour l'hépatite C.

Le danger du VHC pour une personne réside dans le fait que la fenêtre sérologique (délai entre l’infection et l’apparition d’une réaction du système immunitaire) peut être assez longue - de plusieurs semaines à six mois.

Il ne détecte pas l'infection et ne commence pas le traitement à temps.

Selon les caractéristiques individuelles de l'organisme, le porteur du VHC peut se manifester sous forme aiguë, ainsi que sous forme de maladie chronique nécessitant un traitement long et coûteux. Lorsque des anticorps anti-VHC sont détectés, une série de tests de laboratoire est effectuée, y compris une PCR pour l'hépatite C. Ce test est effectué sur toutes les personnes chez qui des anticorps sanguins contre le VHC ont été détectés.

Qu'est-ce que l'analyse PCR?

Analyse en laboratoire de la PCR pour l'hépatite C - l'étude du matériel biologique afin de détecter la présence de flavavirus.

La réaction en chaîne de la polymérase (au sens abrégé) montre la valeur quantitative de la lésion virale du corps, ses caractéristiques qualitatives, ainsi que le génotype du virus contenant l'ARN.

La méthode et la durée du traitement, ainsi que le facteur épidémiologique (degré de risque de transmission à un autre porteur) sont déterminés sur la base de ces analyses et d'analyses complémentaires.

Qu'est-ce que l'analyse d'ARN de l'hépatite C?

La PCR de l’hépatite C est aussi appelée analyse d’ARN (ARN du VHC), car Le flavavirus contient une particule d'ARN avec une taille de virion de 30 à 60 nm. L'une des caractéristiques de ce microorganisme est sa forte propension aux mutations.

Chacune des sous-espèces (génotypes) du virus a une résistance différente, ce qui entraîne différentes méthodes de traitement et la nature du pronostic ultérieur pour le patient.

Le matériel biologique (sang veineux) est administré l'estomac vide et, en règle générale, testé par la méthode de PCR en temps réel (diagnostic en temps réel extrêmement sensible avec une limite de détection inférieure à 15 UI / ml à l'aide de systèmes automatisés fermés).

Il existe d'autres tests, par exemple COBAS AMPLICOR avec une sensibilité de 50-100 UI / ml. Pour tout test de laboratoire, le seuil de sensibilité est important, c'est-à-dire la capacité du réactif à détecter la concentration minimale de virus dans le matériel biologique.

Types d'analyse de l'hépatite C par PCR

La PCR de l'hépatite C comprend trois composants importants:

  • analyse qualitative;
  • analyse quantitative;
  • génotypage.

Ces tests vous permettent de déterminer la nature de la virémie, ainsi que les caractéristiques génétiques de l'agent pathogène. En fonction de la sensibilité du système de diagnostic, l’étude est réalisée une fois et, parfois, un deuxième test est effectué avec un réactif plus sensible pour confirmer ou affiner les résultats.

PCR de haute qualité de l'hépatite C

L'analyse qualitative de l'hépatite C par PCR est un autre nom courant pour l'analyse de la réaction en chaîne de la polymérase. La sensibilité standard du test, qui permet de détecter la présence de lésions virales, est comprise entre 10 et 500 UI / ml.

Une analyse PCR de l’hépatite C négative montre que la concentration de virus dans le sang du patient est inférieure au seuil de sensibilité du système de diagnostic.

Si la PCR de haute qualité a donné la réponse "non détectée", il est important de déterminer le seuil de sensibilité du réactif lors du traitement suivant.

Les fractions protéiques au flavavirus apparaissent beaucoup plus tard.

PCR quantitative de l'hépatite C

La PCR quantitative de l'hépatite C est un indicateur de la charge virale, qui reflète le niveau de concentration en ARN du flavavirus dans le corps. C'est un indicateur montrant combien de fragments d'ARN viral sont contenus par centimètre cube de sang. Les résultats de la PCR de l'ARN de l'hépatite C dans un test quantitatif en système conventionnel sont indiqués en unités internationales par millilitre (UI / ml) et peuvent être enregistrés de différentes manières, par exemple 1,7 million ou 1,700 000 UI / ml.

Le diagnostic quantitatif PCR de l'hépatite C est prescrit aux patients avant le début du traitement antiviral et à la 12e semaine de traitement afin d'évaluer les résultats de la méthode choisie pour traiter le VHC. La charge virale permet de déterminer trois indicateurs importants de la maladie:

  • l'infectivité, c'est-à-dire le degré de risque de transmission du virus d'un porteur à un autre (plus la concentration d'ARN de flavavirus est élevée, plus le risque d'infecter une autre personne est élevé, par exemple par contact sexuel);
  • méthode et efficacité du traitement;
  • la durée et le pronostic du traitement antiviral (plus la charge virale est élevée, plus le traitement dure longtemps).

Le diagnostic quantitatif PCR de l'hépatite C par PCR dépend du type de test de laboratoire et du seuil de sensibilité. La limite inférieure de la norme est considérée comme l'indicateur allant jusqu'à 600 000 UI / ml, la valeur moyenne se situant dans la plage de 600 000 à 700 000 UI / ml. Des résultats de 800 000 UI / ml et plus sont considérés comme des taux élevés de virus contenant l'ARN.

Génotypage

En raison de la forte activité mutationnelle du VHC dans la nature, lors du test, il est important d’identifier quel génotype du virus se trouve dans le sang du patient. Au total, 11 génotypes du virus de l'hépatite C ont été enregistrés sur la planète, comprenant de nombreuses sous-espèces (sous-types). Sur le territoire de la Fédération de Russie distribué 1,2 et 3.

L’ARN PCR de l’hépatite C avec le génotypage est une composante très importante de l’analyse, car permet au médecin de déterminer la résistance (résistance) du virus, de sélectionner les médicaments appropriés et de prescrire un traitement.

Le génotypage vous permet également de déterminer indirectement l'état du foie. Par exemple, le génotype 3 du VHC est souvent accompagné d'une stéatose, dans laquelle la graisse s'accumule dans les cellules de l'organe.

Un test sanguin de PCR pour l'hépatite C devrait donner un chiffre qui détermine le génotype. Les réponses de laboratoire peuvent indiquer «non typé», ce qui signifie qu'un virus contenu dans du sang humain n'est pas détecté par le système de test. Cela peut indiquer que le génotype n'est pas typique pour une zone géographique donnée. Dans ce cas, vous devez répéter l'analyse avec une plus grande sensibilité du système de diagnostic.

Décodage de l'analyse PCR pour l'hépatite C

Le test de déchiffrement quantitatif PCR de l'hépatite C peut être basé sur les données ci-dessus. Lors de l'obtention des résultats des tests de laboratoire, les données suivantes sont généralement écrites:

  • «Trouvé» / «non trouvé» (PCR de haute qualité pour l'hépatite C);
  • le nombre de fractions contenant l'ARN, par exemple 831 680 ME / ml (analyse PCR quantitative);
  • la figure qui détermine le génotype du VHC, par exemple - 1, 2, 3, 4;
  • Le nom du test est le plus souvent en temps réel.

Le plus important pour déchiffrer l'analyse de la PCR pour l'hépatite C est le deuxième paragraphe, qui montre la charge virale, qui détermine le pronostic, la méthode et la durée du traitement.

Si le test PCR de recherche de l'hépatite C est négatif et si le test ELISA est positif, qu'est-ce que cela signifie?

Pour déchiffrer les tests de laboratoire, il est important de contacter un hépatologue ou un spécialiste des maladies infectieuses, qui expliquera les informations obtenues en fonction du type de système de diagnostic et de son seuil de sensibilité. Dans la pratique médicale, il existe de nombreuses données de tests sanguins qui peuvent induire en erreur une personne sans formation médicale.

Par exemple, si le test de PCR de l’hépatite C est négatif et si le test ELISA est positif, il se peut qu’il n’y ait pas de VHC dans le sang du patient à l’heure actuelle, mais il souffrait auparavant d’une forme aiguë de l’hépatite C. il y a des anticorps dans le sang qui ont été produits après l'invasion du virus dans le passé. Mais dans la pratique médicale moderne, l’analyse ELISA est considérée comme insuffisamment fiable et donne souvent des résultats inhabituels. Les médecins l’utilisent donc comme test de dépistage primaire. Lors du diagnostic d'une maladie, les spécialistes sont guidés avec précision par les tests PCR.

Vidéo utile

La vidéo suivante donne une description très détaillée et intéressante de l’essence de la méthode PCR, de la manière dont l’analyse est effectuée:

Conclusion

Pour l'analyse de la PCR pour l'hépatite C, le sang veineux est généralement prélevé. Le plus souvent, il y a un double apport de matériel biologique - pour ELISA et directement pour le test PCR. Pour que les résultats des tests soient corrects, il est nécessaire de respecter les règles de base pour l'échantillonnage en laboratoire de matériel biologique:

  • le sang à analyser est donné dans la première moitié de la journée à jeun;
  • entre le repas et le sang doit prendre au moins 8 heures;
  • l'alcool et les aliments frits doivent également être exclus avant le test;
  • la veille du don de sang, il est nécessaire d'éviter un effort physique intense.

Les résultats des tests sanguins sont généralement prêts le lendemain.

Diagnostic du virus de l'hépatite C

Le virus de l'hépatite C (VHC) est un virus de la famille des Flaviviridae contenant de l'ARN. Cette infection est capable de se multiplier dans les cellules sanguines (monocytes, neutrophiles, lymphocytes B et macrophages) et touche également les cellules du foie lui-même - les hépatocytes. En raison du degré élevé d'activité mutationnelle, ce type d'hépatite est capable d'éviter l'exposition au système immunitaire humain.

Il existe 11 génotypes et la masse de sous-types d'un tel virus, qui diffèrent par le degré d'atteinte hépatique et ont une incidence sur la durée du traitement de l'hépatite. Une telle variété d'hépatite C nécessite différentes méthodes de traitement antiviral. Par exemple, les génotypes de l'hépatite 1 et 4 doivent être traités pendant 48 semaines et pour un traitement contre les virus des deuxième et troisième types, cela peut ne prendre que 24 semaines.

Après que le test rapide de dépistage de l'hépatite C ait donné un résultat positif, une analyse PCR est effectuée pour détecter l'ARN du virus dans des échantillons de sang.

Diagnostic PCR

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est une technique expérimentale de détection des virus. Une telle analyse de l'hépatite C peut augmenter de manière significative la concentration de certains fragments d'ADN ou d'ARN du virus dans les échantillons transférés. Cela permet de les reconnaître et même de compter le nombre.

Ce test de l'hépatite C est effectué selon la procédure suivante:

  1. Un échantillon de sang (matériel génétique) pouvant contenir le gène de l'hépatite souhaité est inséré dans un tube à essai. Des substances spéciales, des amorces, sont placées dessus. Ce sont des segments courts du gène souhaité, synthétisés chimiquement. De l'ADN ou de l'ARN polymérase est également ajouté à ce vaisseau, capable de former des chaînes d'acide nucléique complètement identiques à l'original. Une sélection de nucléotides libres, qui sont des matériaux de construction spéciaux pour l'ADN et l'ARN, est ajoutée à la composition obtenue et l'un d'eux contient de minuscules particules de phosphore radioactif.
  2. Le mélange résultant est initialement chauffé à 95 degrés, de sorte que les deux hélices d’ADN entrelacées à l’état normal sont déroulées.
  3. Pour poursuivre l'analyse, le médicament est refroidi et les amorces se fixent à la section souhaitée du génome du virus de l'hépatite, empêchant ainsi l'ADN de se former en une double hélice. Lorsque le mélange refroidit, la polymérase recherche des chaînes uniques de nucléotides. Lors de la fixation de cette enzyme, celle-ci glisse le long de la chaîne d'ADN (en bloc le long de la corde) et, sur la double hélice, ne peut pas «fonctionner», le mélange est chauffé à cette fin.
  4. Pour prolonger l'analyse, un réchauffement est effectué, ce qui conduit à nouveau à la séparation des chaînes de nucléotides. Lorsque de tels cycles de PCR sont effectués dans l'échantillon, le nombre de gènes d'hépatite souhaités augmente dans une proportion géométrique et les matériaux génétiques restants ne sont produits (formés) que de manière linéaire.
  5. Pour compléter l'étude, la solution est nettoyée des particules nucléotidiques résiduelles. Ils sont séparés par électrophorèse, avec la séparation par les paramètres du poids moléculaire des chaînes d'ADN. De tels tests d'hépatite C utilisant la PCR vous permettent de déterminer si les gènes viraux souhaités sont présents dans l'échantillon ou non.

L'avantage de ce test est le seuil très élevé de la réaction PCR. Idéalement, une telle technique de diagnostic ne requiert qu'un génome du virus pour l'ensemble de l'échantillon.

De plus, cette PCR est complètement spécifique. Dans chacun des gènes, il existe une séquence unique de nucléotides qui, comme une empreinte digitale, ne peut être répétée nulle part. Pour cette analyse sur l'hépatite C, les amorces sont synthétisées de manière à ce qu'elles correspondent absolument aux régions uniques des gènes recherchés, qu'aucune autre séquence ne possède.

Cette technique vous permet également d’analyser l’hépatite C et de les déterminer, ce qui aide à établir le diagnostic final.

Une telle analyse de laboratoire fournit des informations autres que la présence ou l'absence d'ARN du virus de l'hépatite C ou d'un autre type d'échantillons de sang. En déterminant le paramètre du rayonnement radioactif, il est possible d'identifier quelle quantité du matériel génétique souhaité se trouvait à l'origine dans l'échantillon étudié. Cela vous permet de déterminer le paramètre de la charge virale appelée concentration de particules d'ARN de l'hépatite dans un certain volume.

Analyse qualitative de la PCR

Cette analyse permet de déterminer la présence du virus de l'hépatite B dans des échantillons de sang. Il devrait être effectué pour toutes les personnes à qui on a trouvé des anticorps anti-hépatite.

À la suite de telles recherches, il ne peut y avoir que deux valeurs:

  • "Détecté." Un tel résultat de test positif est interprété comme suit: dans l'échantillon analysé, des fragments de matériel biologique de l'ARN du virus de l'hépatite ont été trouvés. Il s’ensuit que le patient était infecté par ce virus. Cela peut indiquer que l'hépatite pathogène se multiplie dans le corps et infecte de nouvelles cellules, détruisant le foie.
  • "Non détecté." Ce résultat indique que dans un échantillon analysé dans ce laboratoire, aucun fragment d’ARN spécifique du virus de l’hépatite C n’a été détecté, mais il est également possible que la concentration de l’ARN du virus pathogène dans l’échantillon de test soit telle que le test n’ait pas permis de le détecter.. Dans de tels cas, il est dit que le niveau de concentration est inférieur au seuil de sensibilité du test.

Un tel test peut également être faux positif ou faux négatif, en raison de la contamination du biomatériau ou de la présence dans les échantillons de substances spécifiques qui réagissent avec les composants chimiques nécessaires à l'analyse.

Il convient de souligner que dans les phases aiguës de l'hépatite C, une étude qualitative utilisant la méthode PCR permet de détecter son ARN après 1-2 semaines à partir du moment de l'infection de l'organisme. Cela signifie que la maladie peut être détectée bien avant l'apparition de ses symptômes externes ou l'apparition d'anticorps anti-hépatite dans le corps.

Le prélèvement sanguin (dans une veine) est effectué de préférence sur un estomac vide.

Analyse quantitative par PCR

À l'aide de cette analyse, déterminez le niveau de concentration du virus de l'hépatite chez le patient (charge virale). Un tel test doit être passé pour estimer la quantité d’ARN du virus par unité d’un certain volume.

Les tests de déchiffrement de l’hépatite C, effectués selon cette méthode, peuvent avoir les résultats suivants:

  • Indicateur quantitatif (en chiffres)

La concentration en virus (quantité) est donnée en termes numériques. À cette fin, différentes unités de mesure sont utilisées: soit UI / ml (unité internationale par millilitre), soit copies / ml (nombre de copies de l’ARN du virus par millilitre). En moyenne, 1 UI / ml correspond à 4 copies / ml, car les systèmes de test différents ont des facteurs de conversion différents pour ces unités.

Les valeurs de faible charge virale sont considérées comme inférieures à 400 000 UI / ml, et 8 000 000 UI / ml sont élevées.

Une telle évaluation quantitative permet de déterminer le degré de contagiosité de la maladie ("contagiosité") du patient. Plus cet indicateur d'analyse est élevé, plus la probabilité de transmission du pathogène à d'autres personnes (par contact sexuel ou verticalement) est élevée.

Ce verdict signifie que la méthode quantitative n'a pas permis de détecter l'ARN de l'hépatite, mais que le virus lui-même est présent dans le corps, mais à de très faibles concentrations. Ceci a été confirmé par une analyse qualitative supplémentaire de la PCR et, par son résultat positif, témoigne de la présence de l'hépatite.

  • Résultat non détecté

    Cette interprétation positive de l'analyse suggère que le test quantitatif lui-même dans un échantillon de sang ne pourrait pas détecter de particules d'ARN spécifiques du virus de l'hépatite C.

  • Une analyse quantitative de la PCR réalisée à différentes périodes de traitement antiviral (1ère, 4ème, 12ème et 24ème semaines) permet de juger de l’efficacité du traitement et d’apporter les modifications nécessaires.

    Spécificité d'analyse

    Ce test doit être passé pour déterminer les différents génotypes de l'hépatite C. Il existe actuellement 11 génotypes de cet agent pathogène et de nombreux sous-types. Dans notre pays, les génotypes de l'hépatite C des 1ère, 2ème et 3ème espèces sont communs. En laboratoire, ils peuvent identifier différents sous-types de ces espèces: 1a, 1b, 2a, 2b ou 3, 4, 5, 6 génotypes avec diverses modifications des sous-types. Pour toutes ces hépatites, la spécificité de la détermination est de 100%.

    La spécification de la modification du génotype permet de sélectionner le traitement approprié. La présence d'un type particulier de génotype chez un patient n'indique pas que la maladie est plus facile ou plus complexe, il ne s'agit que de types du virus de l'hépatite et rien de plus.

    Dans les cas où le génotype du virus ne peut pas être isolé en laboratoire, le résultat peut être donné: «Non typé. Étaient des génotypes étudiés: tel ou tel »(par exemple, 1a, 2c, 3av). Ce décodage suggère qu’il n’existait dans ce laboratoire aucun réactif approprié permettant de déterminer le génotype du virus de l’hépatite. L'étude a été testée pour les virus, les données de la liste, mais leur conformité avec les échantillons d'ARN n'a pas été identifiée.

    Pour établir un diagnostic final, un seul type d'analyse est insuffisant. Chacun des tests peut donner un résultat faussement positif. Pour déterminer avec précision le type d'hépatite et l'étendue des dommages causés par cette infection du corps, effectuez une étude approfondie. Il effectue une biopsie du foie et teste ses enzymes: ALT, ASAT, ainsi que la phosphatase alcaline et la LDH. Un test de bilirubine et une analyse de l'indice de prothrombine peuvent également être effectués.

    Seul un ensemble de tests de ce type et d’analyses de laboratoire, assorti d’une analyse générale de l’état du patient, permettra de déterminer la présence d’une hépatite dans le corps, sa forme ainsi que sa gravité. Sur cette base, le médecin peut déterminer la poursuite du traitement et établir un pronostic éventuel pour le patient.

    VHC, ARN quantifié [PCR en temps réel]

    Une étude visant à identifier l'agent responsable de l'hépatite C (HCV), au cours de laquelle la présence du matériel génétique (ARN) du virus et sa quantité (charge virale) dans un échantillon de sang est déterminée à l'aide de la méthode de réaction en chaîne par polymérase en temps réel (RT-PCR).

    L'ARN du VHC peut être détecté à une concentration située au-delà de la limite inférieure de la plage de concentration linéaire. La plage de concentration linéaire est la plage dans laquelle vous pouvez calculer avec précision le nombre de copies de l'agent pathogène. Pour cette analyse, la plage linéaire de concentration en ADN du VHC déterminée par l'amplificateur de détection est comprise entre 7,5 × 10 2 - 1,0 × 10 8 copies / ml d'échantillon.

    Synonymes russes

    Virus de l'hépatite C (VHC), dosage quantitatif de l'ARN.

    Synonymes anglais

    ARN du virus de l'hépatite C, PCR quantitative, PCR en temps réel, sang, charge virale du VHC, ARN du virus de l'hépatite C Quant.

    Méthode de recherche

    Réaction en chaîne par polymérase de transcriptase inverse en temps réel.

    Quel biomatériau peut être utilisé pour la recherche?

    Comment se préparer à l'étude?

    Ne fumez pas pendant 30 minutes avant de donner du sang.

    Informations générales sur l'étude

    Le virus de l'hépatite C (VHC) est un virus à ARN de la famille des Flaviviridae qui infecte le foie. Il est capable de se multiplier dans les cellules sanguines (neutrophiles, monocytes et macrophages, lymphocytes B) et de provoquer une cryoglobulinémie, la maladie de Sjogren et des maladies lymphoprolifératives à lymphocytes B. Le VHC, en raison de sa forte activité mutationnelle, est capable d’éviter une exposition aux mécanismes de protection du système immunitaire. Il existe 6 génotypes et de nombreux sous-types du virus, qui ont différentes significations pour prédire le développement de la maladie et l'efficacité du traitement antiviral.

    Le principal mode de transmission se fait par le sang (médicaments pour les transfusions sanguines et plasmatiques, organes de donneurs, seringues non stériles, aiguilles, outils pour le tatouage, le piercing). Une infection par contact sexuel et par le bébé de la mère lors de l'accouchement est probable, mais cela se produit rarement.

    L'hépatite virale aiguë se caractérise généralement par une évolution asymptomatique et reste non détectée dans la plupart des cas. La maladie est aiguë chez seulement 15% des personnes infectées, avec nausée, courbatures, manque d'appétit et perte de poids (rarement accompagnée d'ictère). 60 à 85% des personnes infectées développent une infection chronique, 15 fois supérieure à la fréquence des infections chroniques de l'hépatite B. L'hépatite virale chronique se produit avec une augmentation des enzymes hépatiques et une manifestation médiocre des symptômes. Chez 20 à 30% des patients, la maladie entraîne une cirrhose du foie, augmentant le risque d'insuffisance hépatique et de carcinome hépatocellulaire.

    La détection de l'ARN du VHC indique la multiplication du virus dans l'organisme et constitue une méthode de diagnostic de la maladie. Le matériel génétique du virus peut être détecté par PCR 10 à 12 jours après l'infection - pendant cette période, les anticorps spécifiques qui se forment plusieurs mois après l'infection sont absents et les indicateurs biochimiques de la fonction hépatique se situent dans les valeurs de référence.

    Grâce à la PCR, l'ARN du virus est détecté qualitativement ou quantitativement. Grâce à la méthode qualitative, la présence du virus de l'hépatite C et sa reproduction active sont confirmées. La détermination quantitative de la charge virale par rapport au génotype du VHC vous permet de surveiller le traitement en cours et de prédire l’évolution de la maladie.

    L'efficacité du traitement est évaluée par la quantité d'ARN avant et pendant le traitement. Habituellement, la charge virale du sang diminue plusieurs fois au cours des trois premiers mois de traitement réussi. Avec un traitement efficace, la virémie est réduite de deux ordres de grandeur au cours des 4 à 12 premières semaines de traitement et après la fin du traitement, le matériel génétique du virus n'est pas détecté dans le sang. L'absence de diminution de la virémie 12 semaines après le début du traitement témoigne de son inefficacité. Il est recommandé d'effectuer l'analyse avant le début du traitement, les 4e, 12e et 24e semaines de traitement et 24 semaines après la fin du cours. La durée du traitement et la fréquence de quantification de l'ARN du virus de l'hépatite C dépendent du génotype du virus et du degré d'atteinte hépatique.

    À quoi sert la recherche?

    • Pour confirmer le diagnostic "d'hépatite virale C".
    • Prédire l'évolution de l'hépatite virale C.
    • Surveiller la thérapie antivirale et décider des tactiques de traitement ultérieures.

    Quand une étude est-elle prévue?

    • Avec la détection qualitative de l'ARN de l'hépatite C.
    • Dans l'hépatite virale aiguë et chronique C.
    • Lorsque l'hépatite mixte.
    • Lors de la planification, pendant et après la fin du traitement antiviral.

    Que signifient les résultats?

    • Non détecté - aucun ARN du virus de l'hépatite C détecté ou une valeur inférieure à la limite de sensibilité de la méthode (200 copies / ml = 400 UI / ml).
    • copies / ml (UI / ml) - ARN du virus de l'hépatite C détecté. Faible virémie (pronostic le plus favorable de la maladie et efficacité du traitement).
    • > 2 * 10 ^ 6 copies / ml (> 4 * 10 ^ 6 UI / ml) - Un ARN du virus de l'hépatite C est détecté. Haute virémie.
    • > 1,0 * 10 ^ 8 copies / ml (> 2 * 10 ^ 8 UI / ml) - L'ARN du virus de l'hépatite C est détecté à une concentration supérieure à la plage de concentration linéaire.

    La plage linéaire de concentration en ARN du virus de l'hépatite C, déterminée par l'amplificateur de détection, est de 7,5 * 10 ^ 2 - 1,0 * 10 ^ 8 copies / ml (1,5 * 10 ^ 3 - 2 * 10 ^ 8 UI / ml).

    Qu'est-ce qui peut influencer le résultat?

    Des résultats peu fiables peuvent être obtenus avec:

    • contamination par biomatériau;
    • la présence dans l'échantillon d'inhibiteurs - substances chimiques et protéiniques affectant les divers composants de la PCR;
    • la présence d'héparine dans le sang.

    Notes importantes

    • Le niveau de charge sanguine virale n'indique pas le degré d'atteinte hépatique ni la gravité de la maladie. Pour leur évaluation, il est nécessaire d'étudier les paramètres biochimiques et les matériaux de biopsie.
    • Lors de la planification du traitement, il est très important de déterminer le génotype du virus de l'hépatite C.

    Également recommandé

    Qui fait l'étude?

    Littérature

    • Zh.I. Vozianova Maladies infectieuses et parasitaires: à 3 tonnes - K.: Health, 2000. - Vol 1.: 600-690.
    • Kiskun A.A. Études immunologiques et sérologiques en pratique clinique. - M.: OOO MIA, 2006. - 471-476 p.
    • Principes de Harrison de médecine interne. 16 e éd. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
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    • Revie D, Salahuddin SZ. Types de cellules humaines pour la réplication du virus de l'hépatite C in vivo et in vivo: assertions anciennes et preuves actuelles. Virol J. 11 juillet 2011; 8: 346. doi: 10,1186 / 1743-422X-8-346. PMID: 21745397.

    Etude PCR pour l'hépatite C: types, indications, transcription

    L'hépatite virale C est une maladie grave qui se manifeste par des lésions du foie. Chez 80% des patients, cela devient chronique. Le virus se multiplie dans les cellules du foie - les hépatocytes - et provoque leur mort. Le tissu mort est remplacé par des foyers de tissu conjonctif, une fibrose se développe.

    Au fur et à mesure que la fibrose se développe, le foie est incapable d'exercer ses fonctions, la cirrhose du foie commence, ce qui est dangereux en raison de ses complications: pression accrue dans la veine porte, saignements gastro-intestinaux, insuffisance de la coagulation sanguine, changements mentaux dus à des lésions des noyaux cérébraux.

    La cause de la maladie est une infection par un virus de la famille des Flaviviridae, appartenant au type des virus à ARN. Cela signifie que le matériel génétique par lequel les protéines de l'agent pathogène sont synthétisées est codé dans la molécule d'acide ribonucléique. L'infection se produit par le sang, sexuellement et d'une femme enceinte jusqu'au fœtus. Malheureusement, un délai suffisamment long peut s'écouler entre l'infection et le début de la production d'anticorps - de deux semaines à six mois. Cela ne permet pas de déterminer l'infection par la méthode de dosage immunologique et de commencer le traitement à un stade précoce.

    Qu'est-ce que l'analyse PCR?

    La PCR est une méthode d'analyse moléculaire qui permet de détecter le matériel génétique de l'agent pathogène dès la première semaine après l'infection en utilisant une réaction en chaîne de la polymérase. L'étude a une spécificité et une précision élevées et permet non seulement de déterminer la présence ou l'absence du virus, mais également sa concentration et son génotype.

    Pour l'étude, le sang d'un patient est prélevé dans lequel l'ARN du virus peut potentiellement être localisé. Des amorces sont ajoutées aux régions synthétisées artificiellement dans le sang du gène de petite longueur souhaité, et l’ARN polymérase est une enzyme spéciale qui augmente de façon répétée la quantité de matériel génétique de l’agent pathogène. À l'aide d'un appareil spécial, plusieurs cycles de chauffage et de refroidissement sont effectués. Ensuite, le matériel est analysé et comparé aux gènes connus du virus, sur la base desquels une conclusion est formulée à propos de la présence ou de l'absence d'infection.

    Types d'analyse PCR pour l'hépatite C

    Il existe trois types d'analyse PCR:

    1. Analyse qualitative de la PCR. La première étape de l'étude. Cela vous permet d'identifier le matériel génétique du virus dans le sang.

  • Analyse quantitative de la PCR. Vous permet de déterminer la charge virale - la concentration du matériel génétique de l'agent pathogène dans un millilitre de sang. Cette étude est réalisée avant le début du traitement, puis au cours de la première, quatrième, douzième et (si le cours est long) vingt-quatrième semaine de traitement pour évaluer son efficacité.

  • Génotypage L'agent causal de l'hépatite C mute souvent et rapidement. Sept variantes de ce génotype du virus ont été trouvées sur la planète. En Russie, les premier, deuxième et troisième types sont courants. La résistance au traitement de chacun des génotypes est différente. Par exemple, l'efficacité du traitement du premier type est de soixante pour cent et, pour les deuxième et troisième, elle atteint quatre-vingt-cinq. Par conséquent, afin de sélectionner les médicaments appropriés et de prescrire un traitement d'une durée suffisante, il est nécessaire de déterminer exactement le type de virus avec lequel le patient est infecté.
  • Indications pour l'analyse PCR de l'hépatite C

    L'étude PCR est prescrite dans les cas suivants:

    • contact avec une personne malade au cours de laquelle une infection pourrait survenir;
    • dosage immunoenzymatique positif;
    • signes de cirrhose: modifications de la taille du foie, hypertrophie de la rate, apparition sur l'abdomen du plexus veineux sous-cutané;
    • l'apparition de symptômes de dommages au foie: douleur à l'abdomen droit, jaunissement de la peau;
    • augmentation de l'activité de l'ALT et de l'AST dans l'analyse biochimique du sang;
    • avant de commencer le traitement pour déterminer la charge virale;
    • surveiller l'efficacité du traitement antiviral;
    • après le traitement pour contrôler la rechute;
    • en présence d'hépatite B diagnostiquée, pour exclure les dommages mixtes au foie.

    Explication des études PCR sur l'hépatite C

    Le décodage de l'analyse PCR et du dosage immunoenzymatique de l'hépatite C doit être effectué par un hépatologue ou un spécialiste des maladies infectieuses. L'analyse des résultats de la PCR est nécessaire en combinaison avec les données d'analyse biochimique du sang, de la biopsie et des ultrasons. Seul un médecin qualifié sera en mesure d'analyser les résultats de la recherche et, sur cette base, de prescrire le traitement approprié.

    Décodage de l'analyse qualitative.

    Dans le matériel biologique analysé trouvé le matériel génétique de l'agent pathogène. Infection confirmée.

    L'infection est absente ou la quantité d'ARN de l'agent pathogène est inférieure à la limite de sensibilité.

    Décodage de l'analyse quantitative.

    Taux normal pour les personnes en bonne santé. Cela signifie qu'il n'y a pas d'ARN de l'hépatite C dans le matériel étudié ou que sa concentration est inférieure au seuil de sensibilité de l'étude.

    La concentration en ARN est inférieure à la plage de quantification. Ces résultats sont interprétés très soigneusement, corrélés avec les données d’autres études, souvent ré-étudiées.

    Le niveau de charge virale à une concentration donnée est considéré comme faible. Habituellement, une diminution de la quantité de virus signifie que le traitement est efficace.

    Plus de 8 * 10 ^ 5 UI / ml

    Le niveau de charge virale à une concentration donnée est considéré comme élevé.

    Plus de 2,4 * 10 ^ 7 UI / ml

    La quantité d'ARN au-dessus de la limite supérieure de la plage de quantification. Il est impossible de tirer des conclusions sur le degré de charge virale avec ce résultat. Habituellement, dans de tels cas, le test est répété avec la dilution d'un échantillon de sang.

    Décoder le génotypage.

    ARN détecté d'un génotype spécifique

    Le virus de l'hépatite C d'un certain génotype et sous-type a été détecté dans le biomatériau. Le résultat est codé en chiffres romains et en lettres latines, par exemple - 1a, 2b. Au total, il y a sept génotypes et soixante-sept sous-types, cependant, en Russie, il n'y a que trois premiers types.

    ARN du virus de l'hépatite C détecté

    L'ARN a été trouvé dans le sang d'un génotype rare pour la Russie, qui ne peut être attribué au premier, deuxième ou troisième type. Plus de recherche est nécessaire.

    Ce résultat indique que le patient est en bonne santé ou que la quantité d'ARN de l'agent pathogène est trop petite.

    Il est possible que l'analyse PCR de l'hépatite C soit négative et que le test d'immunosorbant lié à une enzyme reconnaisse les anticorps contre le virus. Cela signifie que le patient a eu l'hépatite C aiguë et a guéri par lui-même. Environ vingt cas d’infection entraînent une guérison spontanée si le corps du patient présente une résistance suffisante à l’infection.

    Bien que la PCR soit une analyse extrêmement précise, ses résultats peuvent être faussés dans les situations suivantes:

    • le sang a été transporté au laboratoire dans des conditions inappropriées, la température a été violée;
    • l'échantillon de biomatériau était contaminé;
    • il y avait des traces résiduelles d'héparine et d'autres anticoagulants dans le sang;
    • Les investigateurs se sont révélés être des inhibiteurs - des substances qui ralentissent ou arrêtent la réaction en chaîne de la polymérase.

    Les avantages de la PCR par rapport aux autres méthodes

    1. Diagnostic dans les premiers stades. La PCR détecte le matériel génétique de l'agent causal. En utilisant l'analyse par immunofluorescence, seules les immunoglobulines peuvent être déterminées - les substances que l'organisme produit en réponse à une infection. En cas d'infection par l'hépatite C, l'intervalle entre l'infection et le début de la réponse immunitaire peut être de plusieurs semaines et plusieurs mois. À ce stade, l'ELISA sera inefficace. La PCR donnera une réponse dans la première semaine après l'infection.

  • Faible probabilité d'erreur. Dans le matériel à l’étude, déterminez l’aire de matériel génétique qui n’est caractéristique que d’un seul type de pathogènes. Cela élimine les faux résultats. Lorsque des erreurs ELISA sont possibles, étant donné que le même type d'anticorps peut être libéré contre différents virus, ces anticorps sont appelés anticorps croisés.

  • Haute sensibilité. La PCR permet de détecter l'ARN de l'agent causal même en quantités minimes. Cela permet d'identifier les infections cachées.
  • Comment se préparer au don de sang pour les études PCR

    Pour l'analyse PCR de l'hépatite C, du sang veineux est collecté. Habituellement, deux portions de sang sont prélevées dans la veine du patient à la fois: la première est envoyée pour la PCR et la seconde par ELISA. Cela a pour but d'évaluer plus précisément le degré d'infection d'un patient par un virus et la manière dont l'immunité lutte contre ce virus.

    Habituellement, le patient est tenu de respecter les règles suivantes:

    • une prise de sang est prise le matin;
    • L'intervalle entre le dernier repas et le don de sang devrait être de huit à dix heures.
    • deux ou trois jours avant l'analyse, il est nécessaire d'abandonner les aliments frits et gras, ainsi que l'alcool;
    • pendant vingt-quatre heures avant l'analyse, le patient doit éviter tout effort physique: ne portez pas de poids, n'allez pas au gymnase ni à la piscine.

    Qu'est-ce que l'ARN de l'hépatite C?

    L’étude de l’ARN du virus de l’hépatite C est la procédure la plus importante, ce qui vous permet de définir avec précision la durée et les méthodes de traitement des patients. Le diagnostic de la maladie consiste en plusieurs analyses de sang, telles que:

    • marqueurs de l'hépatite C (anti-VHC);
    • détermination de l'ARN du virus de l'hépatite C (ARN du VHC).

    La première étude est faite au premier soupçon d'hépatite. La deuxième option est la plus importante dans le traitement de l’ARN du VHC, alors considérez-la plus en détail.

    Qu'est-ce que l'hépatite virale C?

    L'hépatite virale C, ou VHC, est une maladie infectieuse qui affecte le foie. L'infection par le virus se fait par le sang. Vous pouvez être infecté par une transfusion sanguine, lorsque les règles de stérilisation des instruments médicaux ne sont pas suivies. Moins souvent, il y a des cas où la maladie est contractée sexuellement ou par une femme enceinte jusqu'au fœtus. L'hépatite C peut être de 2 types.

    L'hépatite C chronique est la plus dangereuse. C'est une forme de maladie qui peut durer toute une vie. Cela entraîne de graves problèmes de fonctionnement du foie, tels que la cirrhose ou le cancer. Chez 70 à 90% des personnes infectées, la maladie devient chronique.

    Le danger le plus important de l’hépatite C est qu’elle se déroule secrètement, sans signes ictériques. Dans le même temps, ils se plaignent le plus souvent de fièvre, de nausées et de vomissements, d'une faiblesse physique, d'une fatigue accrue, d'une perte d'appétit et d'un poids. Dans le même temps, sur le fond d'un petit durcissement du tissu hépatique, sa dégénérescence maligne se produit assez souvent. Pour cette raison, l'hépatite C est souvent qualifiée de «bombe à retardement» ou de «tueur affectueux».

    Une autre caractéristique de la maladie est son développement très lent, estimé en dizaines d’années.

    En règle générale, les personnes infectées ne ressentent aucun symptôme et ne sont pas conscientes de leur véritable condition. Souvent, une maladie ne peut être détectée qu'en contactant un médecin traitant d'un autre sujet.

    Les personnes à risque comprennent:

    • les enfants qui ont reçu le virus de l'hépatite C de leur mère;
    • les toxicomanes;
    • les personnes qui ont percé des parties du corps ou qui ont été tatouées avec des instruments non stériles;
    • recevoir du sang ou des organes d'un donneur (jusqu'en 1992, lorsque l'hémodialyse n'était pas pratiquée);
    • personnes infectées par le VIH;
    • personnel médical en contact avec des patients infectés.

    Détermination de l'ARN de l'hépatite C

    L'ARN du virus de l'hépatite C, également appelé PCR de l'hépatite C, est une étude de matériel biologique (sang) qui peut être utilisée pour déterminer la présence directe du génomatériel du virus de l'hépatite lui-même dans le corps (tout virus isolé est un simple fragment d'ARN).

    La principale méthode d’essai est la PCR ou la méthode de réaction en chaîne de la polymérase.

    Il existe deux types de tests sanguins pour l'ARN du VHC:

    Test de qualité

    Une analyse qualitative permet de déterminer si le virus est dans le sang. Tous les patients chez qui des anticorps anti-hépatite C ont été trouvés doivent réussir ce test. Selon ses résultats, vous pouvez obtenir 2 réponses: virus "présent" ou "absent". Par un résultat de test positif (détecté), on peut juger de la reproduction active d’un virus qui infecte les cellules saines du foie.

    Le test réalisé sur une PCR de haute qualité est réglé sur une sensibilité spécifique, allant de 10 à 500 UI / ml. Si le virus de l'hépatite détecté dans le sang avec une teneur spécifique inférieure à 10 UI / ml, la détection du virus peut devenir impossible. Une très faible teneur en virus spécifique est observée chez les patients pour qui un traitement antiviral a été prescrit. Par conséquent, il est important que la sensibilité du système médical soit élevée pour diagnostiquer et établir un résultat qualitatif dans la réaction en chaîne de la polymérase.

    Souvent, la réaction en chaîne par polymérase de l'hépatite C est effectuée immédiatement après la découverte des anticorps correspondants. Des tests ultérieurs, lors du passage du traitement antiviral, sont effectués les 4ème, 12ème et 24ème semaines. Et une autre analyse après la fin du HTP est faite après 24 semaines. Puis - une fois par an.

    Test quantitatif

    L'analyse quantitative de l'ARN de la PCR, parfois appelée charge virale, détermine la concentration (contenu spécifique) du virus dans le sang. En d'autres termes, la charge virale est définie comme une certaine quantité d'ARN viral, qui peut se trouver dans une quantité spécifique de sang (il est courant d'utiliser 1 ml, égal à 1 cm dans un cube). Les unités pour les résultats des tests sont des unités internationales (standard) divisées par un millilitre (UI / ml). Le contenu du virus apparaît parfois différemment, cela dépend des laboratoires où la recherche est menée. Pour l'hépatite C, la détermination quantitative utilise parfois des valeurs telles que copies / ml.

    Vous devez comprendre que la sévérité de l'hépatite C ne dépend pas spécifiquement de la concentration de cette souche dans le sang.

    Vérifier la "charge virale" vous permet de déterminer le degré de contagiosité de la maladie. Ainsi, le risque d'infecter une autre personne par un virus augmente avec l'augmentation de la concentration d'hépatite dans le sang. En outre, la teneur élevée en virus réduit l’effet du traitement. Par conséquent, une faible charge virale est un facteur très favorable pour la réussite du traitement.

    En outre, le test de dépistage de l'hépatite C et sa détermination par PCR jouent un rôle important dans l'application du traitement de la maladie et déterminent le succès du traitement. Sur la base des résultats du test, un cours de rééducation est prévu. Par exemple, si la concentration spécifique du virus de l'hépatite est trop lente, le traitement antiviral est prolongé, et inversement.

    En médecine moderne, on pense que la charge de plus de 800 000 ME / ml est élevée. Une charge supérieure à 10 000 000 ME / ml est considérée comme critique. Mais les experts de différents pays n’ont toujours pas le même avis sur les limites de la charge virale.

    La fréquence du test quantitatif

    En règle générale, une analyse quantitative de l'hépatite est effectuée avant le traitement antiviral et trois mois après la fin des procédures médicales pour déterminer la qualité du traitement effectué.

    En conséquence, un test quantitatif sera considéré comme une évaluation quantitative des résultats pour l'échantillon spécifié ci-dessus. En conséquence, le verdict «en dessous de la plage mesurée» ou «non détecté dans le sang» sera publié.

    Le paramètre de sensibilité d'un test qualitatif est généralement inférieur à celui d'une analyse quantitative. La transcription «manquant» montre que les deux types de tests n'ont pas trouvé l'ARN du virus. Lorsque l'indice de test était «en dessous de la plage mesurée», une analyse quantitative de type n'a probablement pas trouvé d'ARN de l'hépatite, bien que cela confirme la présence d'un virus ayant un contenu spécifique très faible.

    L'hépatite C et ses génotypes

    Le génotypage de l'ARN du virus de l'hépatite C diagnostique la présence de différents types génétiques de l'hépatite C. Plus de 10 types du génome viral sont connus de la science, mais pour la pratique médicale, il suffit de distinguer plusieurs génotypes qui ont la plus grande part dans la région. La détermination du type génétique joue un rôle clé dans le choix du moment du traitement, ce qui est indispensable si vous prenez en compte le vaste éventail d'effets secondaires des médicaments pour le traitement de l'hépatite.

    Méthodes de traitement de l'hépatite virale C

    En règle générale, le seul moyen efficace de guérir le virus de l'hépatite est d'associer deux médicaments: l'interféron alpha et la ribavirine. Individuellement, ces médicaments ne sont pas aussi efficaces. La posologie recommandée et le moment d'utilisation ne doivent être prescrits que par un médecin et individuellement pour chaque patient. Le traitement avec ces médicaments peut prendre de 6 à 12 mois.

    Aujourd'hui, pas inventé de médicaments qui garantissent une guérison à 100% du virus. Cependant, avec le bon traitement, la guérison des patients peut atteindre 90% du nombre de cas.

    Analyse qualitative de la PCR pour l'hépatite C

    L'hépatite est une maladie grave qui a de nombreuses causes. La base de son développement est les dommages directs ou indirects au foie. Vu son importance pour tout l'organisme, on ne peut que deviner à quel point la pathologie est difficile. Dans cet article, nous examinerons plus en détail les caractéristiques du déroulement et du diagnostic en laboratoire de l'hépatite C.

    La cause de la maladie est un agent viral qui fait référence à des agents pathogènes contenant de l'ARN. Il a une caractéristique distinctive - la capacité de muter, c'est-à-dire de changer de structure. De ce fait, l'infection échappe à l'attaque du système immunitaire et conduit dans la plupart des cas à une inflammation chronique du foie.

    Compte tenu de l’existence de différents sous-types du virus, la sélection des médicaments doit être basée sur les résultats du génotypage. Malgré une longue étude de la maladie et de la structure du VHC, il n'a pas encore été possible de développer un vaccin spécifique pour la maladie.

    Les difficultés du diagnostic précoce résident dans l'évolution asymptomatique de l'hépatite, à la suite de laquelle une personne consulte un médecin au stade de la cirrhose. Afin de détecter la maladie à temps, des examens médicaux réguliers sont nécessaires. Il n’est possible de détecter le VHC que par des analyses de sang en laboratoire et d’empêcher la contamination d’autres personnes. Le fait est que le porteur de l’infection peut pendant longtemps ne pas deviner la pathologie et continuer à transmettre le virus à des personnes en bonne santé.

    Modes de transmission

    Dans la plupart des cas, le virus se propage par le sang car il contient la plus forte concentration d'agents pathogènes. Ainsi, l'infection est transmise:

    • avec hémodialyse;
    • avec une aiguille infectée;
    • en train de se battre, lorsque la peau est blessée et que le contact du sang se produit;
    • avec transfusion sanguine (transfusion sanguine).

    La probabilité d'infection au cours de l'intimité est insignifiante, car le sperme et les pertes vaginales contiennent une petite quantité d'agents pathogènes. Le risque d'infection est considérablement accru en violation de l'intégrité de la membrane muqueuse des organes génitaux. Ceci est observé avec le sexe agressif et anal.

    Quant au mode de transmission verticale, il est effectué dans le processus du travail. Pendant la période de gestation du fœtus, l'agent pathogène ne peut pas pénétrer dans le placenta jusqu'à l'embryon. Lors de l’accouchement naturel, l’agent pathogène est transmis à l’enfant lorsque la peau est blessée et que le contact avec le sang de la mère est observé.

    Après la pénétration de l'agent pathogène dans un organisme sain, la synthèse des anticorps qui protègent de l'infection et appartiennent aux structures immunitaires commence. On les trouve dans l'étude initiale d'une personne utilisant ELISA.

    Une réaction en chaîne de la polymérase est effectuée pour confirmer le diagnostic du patient. C'est une analyse du matériel génétique d'un agent pathogène et la détermination de la charge virale.

    Diagnostic de laboratoire de l'hépatite C

    Le diagnostic de laboratoire commence par un dosage immunoenzymatique. Sa tâche principale est de détecter les anticorps produits contre l'agent pathogène. Son efficacité est de près de 95%. Grâce à cette recherche, il est possible d'identifier le porteur du virus au stade préclinique et de l'envoyer pour un examen plus approfondi.

    Une analyse qualitative de l'ELISA indique la présence ou l'absence d'immunoglobulines dans le sang du patient. Son résultat peut être "positif" ou "négatif". Après avoir reçu la première réponse, la personne est envoyée pour le prochain examen - PCR. Son prix dépend de la qualité des réactifs et du laboratoire. Le coût de la réaction en chaîne de la polymérase peut atteindre 4 000 roubles.

    Caractéristiques de la PCR

    En utilisant une réaction en chaîne de la polymérase, même une petite quantité de matériel biologique nous permet d’estimer la charge virale dans le sang, c’est-à-dire de calculer la concentration en agents pathogènes dans un millilitre de liquide.

    Avec l'avènement de la PCR, le diagnostic d'hépatite est devenu beaucoup plus facile. L'analyse permet d'identifier l'ARN du VHC, d'établir le stade du processus infectieux et l'infectiosité du porteur du virus.

    Il existe plusieurs types de diagnostic génétique:

    1. Analyse qualitative de la PCR pour l'hépatite C - confirme la présence ou l'absence de VHC dans le sang du sujet:
    2. quantitatif, à travers lequel vous pouvez calculer la concentration de virus et établir le stade de la maladie. Le résultat est donné en UI / ml ou en copies / ml (selon le laboratoire);
    3. génotypage - nécessaire pour déterminer le génotype du VHC. Ceci est nécessaire pour la sélection exacte des médicaments qui seront les plus efficaces dans ce cas. L'analyse indique indirectement la gravité du processus pathologique dans le foie. Ainsi, avec le troisième génotype de l'agent pathogène, on observe le plus souvent la stéatose, à la base de l'accumulation de graisse dans les hépatocytes (ses cellules). En outre, le type de virus influe sur l'issue et la durée de l'évolution thérapeutique.

    Analyse qualitative de la PCR pour l'hépatite C

    Tout d'abord, le matériel biologique est examiné en laboratoire pour détecter la présence d'ARN du VHC. Il est important de se rappeler qu'une analyse qualitative de l'hépatite C a un certain niveau de sensibilité et peut donc ne pas toujours donner la bonne réponse. Dans ce cas, il est recommandé de refaire le diagnostic en laboratoire avec d'autres réactifs.

    Pour obtenir des résultats fiables, il faut utiliser des systèmes d’essai d’une sensibilité d’au moins 50 UI / ml.

    Le résultat du diagnostic peut être «positif» ou «négatif». Si l'agent pathogène n'est pas trouvé dans le sang, l'étude est terminée. Si un agent pathogène est détecté dans un échantillon, la charge virale est quantifiée.

    Une réponse faussement négative est obtenue lorsqu'un processus technologique est violé, par exemple des composants actifs qui suppriment la construction de copies de l'agent pathogène entrent dans le support. Ainsi, il n’est pas possible d’afficher une image sanguine exacte, c’est pourquoi l’infection d’une personne n’est pas diagnostiquée.

    Un résultat faussement positif peut être obtenu si le tube de collecte du matériel biologique, ainsi que l'environnement de l'étude, étaient contaminés. De plus, une telle réponse d'analyse est possible avec des infections mixtes, lorsque le foie est affecté de plusieurs virus, par exemple les hépatites C et D.

    Indications pour la recherche qualitative

    Le médecin peut prescrire à un patient une étude qualitative sur l'identification de l'ARN du virus de l'hépatite C:

    • à la réception d'une réponse immunoenzymatique positive ou douteuse;
    • pour la vérification du diagnostic;
    • déterminer la charge virale;
    • fixer le stade de la maladie;
    • diagnostic d'infection mixte. L'hépatite C infecte souvent le foie simultanément au virus «D»;
    • détermination des tactiques thérapeutiques en tenant compte du génotype de l'agent causal;
    • évaluer la dynamique des changements au cours du traitement avec des médicaments antiviraux.

    Les avantages de la réaction en chaîne de la polymérase comprennent:

    1. haute sensibilité de la technique, ce qui permet d'établir le fait de l'infection au stade préclinique;
    2. identification du matériel génétique de l'agent pathogène et non des anticorps dirigés contre lui;
    3. la possibilité d'établir un sous-type d'agent pathogène;
    4. haute vitesse de diagnostic, car il ne nécessite pas d'ensemencement du matériau sur le milieu nutritif, et il suffit d'utiliser des systèmes de test spécifiques. Une personne reçoit le résultat après 5 heures.
    5. polyvalence. L'analyse permet d'identifier tout matériel génétique (ARN, ADN). Pour cette raison, le médecin peut confirmer l'hépatite C et d'autres types de la maladie (B);
    6. la capacité de détecter une infection latente.

    Recherche quantitative

    Dans l'étude du sang en utilisant la réaction en chaîne de la polymérase peut calculer le nombre d'agents pathogènes dans un volume fixe de matériel biologique. L'indicateur est présenté en UI / ml. Grâce à l'analyse, il est possible de déterminer le degré de contagion du patient, de déterminer le stade du processus infectieux et d'évaluer l'efficacité du traitement médicamenteux.

    Sur la base de la PCR, le spécialiste décide quelles doses de médicaments peuvent bloquer la reproduction des agents pathogènes. De plus, la durée du traitement antiviral et le pronostic à vie sont déterminés. Il est important de rappeler que les systèmes de test ont une sensibilité élevée. La méthode permet donc de confirmer l'infection d'une personne au stade préclinique.

    Génotypage

    Étant donné que l'agent pathogène est capable de muter, son génotype est nécessaire pour déterminer la tactique de traitement et le choix des médicaments antiviraux. Par exemple, le traitement de l’hépatite B VHC 1 dure 48 semaines, avec une tendance positive observée dans seulement 60% des cas. Les génotypes 2 et 3 ont un pronostic plus favorable. Les antiviraux sont prescrits pour 8 mois et leur efficacité atteint 85%.

    Selon les statistiques, dans la plupart des cas, les VHC 1, 2 et 3 sont enregistrés dans la Fédération de Russie.

    Lors du déchiffrement d'un test de laboratoire, cette réponse peut être indiquée - «non typée». Cela signifie qu'un virus circule dans le système circulatoire du patient et ne peut pas être reconnu par le système de test. Le résultat de l'analyse dans ce cas indique que l'agent pathogène n'est pas typique pour une zone géographique donnée.

    Comment obtenir des résultats fiables?

    Pour qu'une étude qualitative de la PCR visant à détecter l'ARN de l'agent causal de l'hépatite C ait donné les bons résultats, il est nécessaire de respecter les exigences relatives à la préparation du diagnostic de laboratoire:

    1. les prélèvements sanguins sont effectués à jeun, et l’espace «affamé» ne doit pas être inférieur à 8 heures;
    2. deux jours avant l'étude, il est recommandé d'arrêter de boire des boissons alcoolisées et d'abandonner les plats épicés, gras et fumés;
    3. annuler l’introduction de médicaments qui réduisent la coagulation du sang, par exemple l’héparine. Si ces médicaments sont prescrits pour des raisons de santé, vous devez en informer le médecin. En outre, le spécialiste doit être au courant de l'admission d'autres médicaments susceptibles d'affecter les résultats des recherches en laboratoire.
    4. À la veille de la collecte du matériel biologique, aucune procédure physiothérapeutique ne doit être effectuée ni soumise à un effort physique intense.

    Les résultats de l'analyse peuvent être influencés non seulement par le donneur de sang, mais également par d'autres facteurs, à savoir:

    • prélèvement de sang de mauvaise qualité;
    • non-respect des recommandations sur le transport de matériel biologique;
    • formation insuffisante des travailleurs de laboratoire;
    • non-respect de la technique de recherche;
    • introduction d'anticoagulants (héparine) à la veille du prélèvement sanguin. Ce groupe de médicaments réduit la coagulation, ce qui ralentit le travail des réactifs.

    Dans différents laboratoires, la réponse diagnostique peut différer légèrement, mais ces erreurs n’affectent pas le résultat final de l’étude.

    Une attention particulière est accordée aux types de systèmes de test utilisés en laboratoire. La préférence est souvent donnée aux réactifs très sensibles. Ceci est important pour les patients à faible charge virale, car il est difficile à détecter.

    Quelle est la fréquence des tests de laboratoire?

    La réaction en chaîne par polymérase primaire est réalisée chez des personnes qui ont été détectées par des anticorps immunoessais dirigés contre l'agent pathogène de l'hépatite. Dans ce cas, il est assigné à confirmer le fait de l'infection d'une personne et à établir le stade de la maladie. En outre, l’analyse permet de déterminer le sous-type de virus, ce qui est particulièrement important pour le choix des médicaments.

    La prochaine période pour les tests de laboratoire obligatoires est de 3 mois à compter du début du traitement antiviral. Les diagnostics permettent d'évaluer l'efficacité des médicaments, d'ajuster la dose ou de les remplacer.

    En plus des tests de base, la PCR peut également être effectuée 4 et 24 semaines après le début du traitement. Le pronostic positif de la maladie est confirmé par une diminution de la charge virale après trois mois de traitement. Par exemple, il devrait passer de 1 million d'UI / ml à plusieurs centaines de milliers.

    Si la concentration d'agents pathogènes dans le sang reste au même niveau ou augmente légèrement, cela indique l'inefficacité des médicaments antiviraux et nécessite leur remplacement. En utilisant la PCR en fin de traitement, il est possible de confirmer le rétablissement du patient.

    Pour interpréter correctement les résultats des diagnostics de laboratoire, il est nécessaire de consulter un hépatologue ou un spécialiste des maladies infectieuses. Compte tenu de la fréquence élevée de fausses réponses en ELISA, l'analyse est utilisée exclusivement pour le dépistage initial. Pour un examen plus approfondi du patient utilisé réaction en chaîne par polymérase.

    Est-il possible de guérir l'hépatite C sans effets secondaires?

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