Virus de l'hépatite C (VHC), cor, antigènes NS3, NS4, NS5, anticorps IgG

La défaite du foie avec un virus de type C est l’un des problèmes graves des spécialistes des maladies infectieuses et des hépatologues. Pour la maladie caractéristique longue période d'incubation, au cours de laquelle il n'y a pas de symptômes cliniques. À l'heure actuelle, le porteur du VHC est le plus dangereux, car il ignore tout de sa maladie et peut infecter des personnes en bonne santé.

Pour la première fois, le virus a commencé à parler à la fin du XXe siècle, après quoi ses recherches à grande échelle ont commencé. Aujourd'hui, il est connu pour ses six formes et un grand nombre de sous-types. Cette variabilité de la structure est due à la capacité de l’agent pathogène à muter.

La base du développement du processus infectieux-inflammatoire dans le foie est la destruction des hépatocytes (ses cellules). Ils sont détruits sous l'influence directe d'un virus à effet cytotoxique. La seule chance d'identifier l'agent pathogène au stade préclinique est le diagnostic de laboratoire, qui implique la recherche d'anticorps et le kit génétique du virus.

Qu'est-ce que les anticorps anti-hépatite C dans le sang?

Une personne qui est loin de la médecine, il est difficile de comprendre les résultats des études de laboratoire, sans avoir aucune idée sur les anticorps. Le fait est que la structure de l'agent pathogène est constituée d'un complexe de composants protéiques. Après être entrés dans le corps, ils font réagir le système immunitaire, comme s'il l'ennuyait de sa présence. Ainsi commence la production d’anticorps dirigés contre les antigènes de l’hépatite C.

Ils peuvent être de plusieurs types. Grâce à l'évaluation de leur composition qualitative, le médecin parvient à suspecter l'infection d'une personne, ainsi qu'à établir le stade de la maladie (y compris le rétablissement).

La principale méthode de détection des anticorps anti-hépatite C est un dosage immunologique. Son but est de rechercher des Ig spécifiques, qui sont synthétisées en réponse à la pénétration de l'infection dans le corps. Notez que le test ELISA permet de suspecter la maladie, après quoi une autre réaction en chaîne de la polymérase est nécessaire.

Les anticorps, même après une victoire totale sur le virus, restent pour le restant de leur vie dans le sang humain et indiquent le contact passé de l'immunité avec l'agent pathogène.

Phases de la maladie

Les anticorps anti-hépatite C peuvent indiquer une étape du processus infectieux-inflammatoire, ce qui aide le spécialiste à sélectionner des médicaments antiviraux efficaces et à suivre la dynamique des changements. Il y a deux phases de la maladie:

• latent. Une personne ne présente aucun symptôme clinique, même si elle est déjà porteuse du virus. Dans le même temps, le test des anticorps (IgG) contre l’hépatite C sera positif. Le niveau d'ARN et d'IgG est faible.
• aigu - caractérisé par une augmentation du titre en anticorps, en particulier des IgG et des IgM, indiquant une multiplication intense d'agents pathogènes et une destruction prononcée des hépatocytes. Leur destruction est confirmée par la croissance des enzymes hépatiques (ALT, AST), révélée par la biochimie. En outre, l'agent pathogène de l'ARN se trouve à une concentration élevée.

La dynamique positive sur le fond du traitement est confirmée par une diminution de la charge virale. Lors de la récupération, l'ARN de l'agent responsable n'est pas détecté, il ne reste que les immunoglobulines G, ce qui indique une maladie transférée.

Indications pour ELISA

Dans la plupart des cas, l'immunité ne peut pas traiter l'agent pathogène lui-même, car il ne parvient pas à réagir efficacement contre lui. Cela est dû à une modification de la structure du virus, qui a pour conséquence que les anticorps produits sont inefficaces.

Habituellement, un test ELISA est prescrit à plusieurs reprises, car un résultat négatif (au début de la maladie) ou un faux positif (chez la femme enceinte, présentant une pathologie auto-immune ou un traitement anti-VIH) est possible.

Pour confirmer ou infirmer la réponse de l'ELISA, il est nécessaire de la reprendre après un mois, ainsi que de faire un don de sang pour la PCR et la biochimie.

Les anticorps anti-virus de l'hépatite C sont étudiés:

1. consommateurs de drogues injectables;
2. chez les personnes atteintes de cirrhose du foie;
3. si enceinte est un virus porteur. Dans ce cas, la mère et le bébé sont soumis à un examen. Le risque d'infection varie de 5% à 25%, en fonction de la charge virale et de l'activité de la maladie;
4. après un rapport sexuel non protégé. La probabilité de transmission du virus ne dépasse pas 5%. Toutefois, en cas de lésion des muqueuses des organes génitaux, des homosexuels, ainsi que des amateurs de changements fréquents de partenaires, le risque est beaucoup plus élevé;
5. après le tatouage et le perçage corporel;
6. après avoir visité un institut de beauté de mauvaise réputation, l’infection pouvant se produire par le biais d’instruments contaminés;
7. avant de donner du sang, si une personne souhaite devenir un donneur;
8. ambulanciers paramédicaux;
9. les pensionnaires;
10. récemment libéré de la MLS;
11. si une augmentation des enzymes hépatiques (ALT, AST) est détectée afin d'exclure les lésions virales de l'organe;
12. en contact étroit avec le porteur du virus;
13. chez les personnes atteintes d'hépatosplénomégalie (augmentation du volume du foie et de la rate);
14. chez les personnes infectées par le VIH;
15. chez une personne présentant un jaunissement de la peau, une hyperpigmentation des paumes, une fatigue chronique et des douleurs au foie;
16. avant la chirurgie prévue;
17. lors de la planification d'une grossesse;
18. chez les personnes présentant des modifications structurelles du foie, détectées par échographie.

Le dosage immunoenzymatique est utilisé pour le dépistage de masse et la recherche de porteurs de virus. Cela aide à prévenir l’apparition d’une maladie infectieuse. Le traitement initié au stade initial de l'hépatite est beaucoup plus efficace que le traitement contre le fond de cirrhose du foie.

Types d'anticorps

Afin d'interpréter correctement les résultats des diagnostics de laboratoire, vous devez connaître le type d'anticorps présents et leur signification.

1. Les IgG anti-VHC sont le type principal d’antigènes représentés par les immunoglobulines G. Elles peuvent être détectées lors de l’examen initial d’une personne, ce qui permet de suspecter la maladie. Si la réponse est positive, il convient de penser au processus infectieux lent ou au contact de l’immunité avec des virus dans le passé. Le patient a besoin d'un diagnostic supplémentaire par PCR;
2. anti-HCVcoreIgM. Ce type de marqueur signifie "anticorps contre les structures nucléaires" de l'agent pathogène. Ils apparaissent peu après l’infection et indiquent une maladie aiguë. L'augmentation du titre est observée avec une diminution de la force de la défense immunitaire et de l'activation des virus dans l'évolution chronique de la maladie. Lorsque la rémission est un marqueur faiblement positif;
3. Total anti-VHC - Indicateur total d'anticorps dirigés contre les composés protéiques structuraux de l'agent pathogène. Cela lui permet souvent de diagnostiquer avec précision le stade de la pathologie. La recherche en laboratoire devient informative au bout de 1 à 1,5 mois à compter du moment où le VHC pénètre dans l'organisme. Les anticorps totaux dirigés contre le virus de l'hépatite C sont une analyse des immunoglobulines M et G. Leur croissance est observée en moyenne 8 semaines après l'infection. Ils persistent toute la vie et indiquent une maladie passée ou son évolution chronique;
4. anti-HCVNS. L'indicateur est un anticorps dirigé contre les protéines non structurelles de l'agent pathogène. Ceux-ci incluent NS3, NS4 et NS5. Le premier type est détecté au début de la maladie et indique une immunité au contact avec le VHC. C'est un indicateur d'infection. La préservation prolongée de son niveau élevé est un signe indirect de la chronicité du processus inflammatoire viral dans le foie. Les anticorps dirigés contre les deux types restants de structures protéiques sont détectés au stade avancé de l'hépatite. NS4 est un indicateur de l'étendue des dommages aux organes et NS5 indique une évolution chronique de la maladie. La réduction de leurs titres peut être considérée comme le début de la rémission. Compte tenu du coût élevé de la recherche en laboratoire, elle est rarement utilisée dans la pratique.

Il existe également un autre marqueur: il s'agit de l'ARN du VHC, qui implique la recherche d'un ensemble génétique de l'agent pathogène dans le sang. Selon la charge virale, le porteur de l'infection peut être plus ou moins infectieux. Pour l'étude, des systèmes de test à haute sensibilité sont utilisés, ce qui permet de détecter l'agent pathogène au stade préclinique. De plus, avec l'aide de la PCR, une infection peut être détectée au stade où les anticorps sont encore absents.

Le temps de l'apparition des anticorps dans le sang

Il est important de comprendre que les anticorps apparaissent à différents moments, ce qui vous permet d'établir plus précisément le stade du processus infectieux-inflammatoire, d'évaluer le risque de complications et de suspecter une hépatite au début du développement.

Les immunoglobulines totales commencent à s'inscrire dans le sang au cours du deuxième mois d'infection. Au cours des 6 premières semaines, le niveau d'IgM augmente rapidement. Cela indique une évolution aiguë de la maladie et une activité élevée du virus. Après le pic de leur concentration, sa diminution est observée, ce qui indique le début de la phase suivante de la maladie.

Si des anticorps de classe G anti-hépatite C sont détectés, il convient de suspecter la fin de la phase aiguë et le passage de la pathologie à la pathologie chronique. Ils sont détectés trois mois après le moment de l’infection dans le corps.

Parfois, des anticorps totaux peuvent être isolés au cours du deuxième mois de la maladie.

Quant aux anti-NS3, ils sont détectés à un stade précoce de la séroconversion, et aux anti-NS4 et -NS5 - à un stade ultérieur.

Décodage de la recherche

Pour la détection d'immunoglobulines par la méthode ELISA. Il est basé sur la réaction antigène-anticorps, qui se déroule sous l'action d'enzymes spéciales.

Normalement, l'indice total n'est pas enregistré dans le sang. Pour l’évaluation quantitative des anticorps, on a utilisé le coefficient de positivité "R". Il indique la densité du marqueur étudié dans le matériel biologique. Ses valeurs de référence vont de zéro à 0,8. La plage de 0,8-1 indique une réponse diagnostique douteuse et nécessite un examen plus approfondi du patient. Un résultat positif est pris en compte lorsque R unités sont dépassées.

Antigènes de l'hépatite C

Au moins 10 protéines structurelles et non structurelles codées par le génome du VHC sont connues à ce jour. Les protéines structurelles comprennent le noyau, l'enveloppe 1 et l'enveloppe 2. La protéine centrale est une protéine de nucléocapside, tandis que l'enveloppe 1 et l'enveloppe 2 sont des glycoprotéines de l'enveloppe externe du virus. La protéine p7 est également codée dans la zone structurelle, dont la fonction n’est pas claire, mais l’analogie avec d’autres membres de la famille des Flaviviridae suggère que sa fonction est associée à la libération du virion à partir d’une cellule infectée.
Cette protéine est clivée par la peptidase cellulaire de l'enveloppe 2, mais pas dans tous les cas, ce qui entraîne l'existence de l'enveloppe 2 sous la forme de deux formes plus et moins étendues.

La région non structurelle du génome du VHC code pour 6 protéines - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A et NS5B. La protéine NS2 est une protéinase virale dépendante des métaux. La protéine NS4A agit comme un effecteur ou un cofacteur pour l'activité protéolytique de NS3 dans les sites de coupe de la polyprotéine du virus NS4A / NS4B, NS4B / NS5A, NS5A.

Actuellement, des fragments de protéines structurelles et non structurelles obtenues par génie génétique (protéines recombinantes) ou par synthèse chimique sont utilisés comme antigènes dans la conception de systèmes de test d'immunoanalyse enzymatique. La première génération de systèmes de dosage immunoenzymatique est apparue sur le marché en 1989 et était basée sur le test ELISA direct. Comme immunosorbant, des fragments de deux protéines, NS3 et NS4, notés 5-1-1 et C100-3, ont été utilisés.

Simultanément, des tests de confirmation basés sur l’immunoblot avec des protéines recombinantes (RIBA) ont été développés. La sensibilité de ces systèmes de test de première génération n'était que de 64% pour l'ELISA et de 55% pour l'immunoblot. Les systèmes de test de la deuxième génération sont apparus sur le marché en 1991. Comme antigènes adsorbés sur la phase solide, des protéines de capside (fragment c22-3) et des régions non structurelles NS3 (fragments c200 et s3S3) et NS4 ont été utilisés dans ces systèmes de test, ce qui a permis d'accroître la sensibilité et la spécificité des études. La réponse immunitaire humorale aux antigènes de la capside (protéines structurelles) étant plus anormale, l'hème étant réduit aux protéines non structurelles, la période allant de l'infection à la séroconversion détectable a été réduite à deux mois.

Des systèmes de test basés sur l'immunoblot de confirmation ont permis d'identifier les antigènes impliqués dans la réaction. Les résultats obtenus en utilisant ces systèmes de test ont été interprétés comme positifs uniquement lorsque les anticorps du substrat à l'étude ont réagi avec au moins deux antigènes, alors qu'en présence d'une réaction avec un seul des antigènes, le résultat a été considéré comme incertain. Il a été constaté que la spécificité de la deuxième génération de systèmes de test dépendait de la source des antigènes. En 1993, la troisième génération de systèmes de test est apparue sur le marché. En plus des antigènes ci-dessus, des antigènes sont également utilisés dans ces systèmes de test, dont la séquence d'acides aminés correspond aux régions immunodominantes des protéines NS5.

Dans les systèmes de test des première, deuxième et troisième générations, des peptides recombinants ou synthétiques ont été utilisés comme antigènes. À l'heure actuelle, il est également possible de sélectionner des systèmes de test de la quatrième génération, dans lesquels des combinaisons de peptides recombinants et synthétiques sont utilisées comme immunosorbant.

L’expérience de l’utilisation de systèmes de test de différentes générations dans le monde est très vaste. Il a été constaté que si des systèmes de test de la première ou de la deuxième génération étaient utilisés chez les patients atteints d'hépatite C virale aiguë, des anticorps étaient détectés à 10-16 ans et, dans certains cas, à 25-30 semaines à compter du début de la maladie, puis des diagnostics de troisième génération permettaient de réduire cette période à 2-3 semaines. Selon les données généralisées, la sensibilité des systèmes de test des première, deuxième et troisième générations est respectivement de 70–80%, 92–95% et 97%.

Dans le même temps, selon S. Colin, 2001, la sensibilité des systèmes de test de troisième génération était de 98,9% chez les patients atteints de maladies chroniques du foie et de 97,2% dans les panels de contrôle sérologiques spéciaux. L'obtention d'une sensibilité élevée des systèmes de test d'immunoenzyme des 3ème et 4ème générations est associée à certains problèmes pour garantir la spécificité de la recherche, ce qui peut dans certains cas conduire à des résultats faussement positifs. Il existe dans la littérature des erreurs possibles dans la spécificité des systèmes de test ELISA 3. Ils sont communs à tous les systèmes de test ELISA, y compris les systèmes de test pour le diagnostic du SIDA.

Les résultats faussement positifs peuvent être dus à une augmentation des niveaux de gamma globulines dans des échantillons (patients de race africaine, myélome, facteurs rhumatoïdes), une maladie du foie (cirrhose, cancer), des maladies auto-immunes (collagénose, hépatite auto-immune), d'autres infections virales (VIH, hépatite B ) et stockage à long terme des sérums dans des conditions de température changeantes. Toute immunisation peut également être accompagnée d’une augmentation de la fréquence des réactions faussement positives. Les mesures actuellement recommandées pour éliminer ce problème sont les suivantes: a) reconfigurer l'échantillon dans le même EFTS; b) détection répétée d'anticorps anti-VHC dans un autre IFTS; c) utilisation de tests de confirmation basés sur ELISA et immunoblot.

Cependant, l'utilisation des méthodes proposées pour confirmer les résultats entraîne souvent des divergences dans leur interprétation finale, comme le montrent des études de chercheurs russes et étrangers.

Actuellement, les fabricants de TPI pour la détection des anticorps anti-VHC atteignent une sensibilité élevée ou grâce à une détection plus complète des anticorps anti-NS3 ou anti-antigènes. Des études comparatives réalisées sur divers groupes à risque et des groupes de contrôle spéciaux ont montré que les systèmes de test qui détectaient mieux les anticorps anti-NS3 se révélaient un peu plus sensibles que les systèmes de test détectant mieux les anticorps dirigés contre les antigènes centraux. Leur sensibilité était respectivement de 99,9% et 98,6%.

Marqueurs totaux et interprétation de l'analyse des anticorps anti-hépatite C

Les lésions virales du foie se manifestent souvent dans la pratique des gastro-entérologues. Et le leader sera certainement l'hépatite C. Parmi ceux-ci, le stade chronique cause des dommages importants aux cellules du foie, ce qui perturbe ses fonctions digestives et ses fonctions de barrière.

L'hépatite C se caractérise par un courant lent, une longue période sans manifestation des principaux symptômes de la maladie et un risque élevé de complications. La maladie ne se dissipe pas longtemps et ne peut être révélée que par un test de détection des anticorps anti-hépatite C et d'autres marqueurs.

Les hépatocytes (cellules du foie) sont affectés par le virus, il provoque leur dysfonctionnement et leur destruction. Peu à peu, après avoir atteint le stade de la chronicité, la maladie entraîne la mort d'une personne. Le diagnostic opportun du patient pour les anticorps anti-hépatite C est capable d’arrêter le développement de la maladie, d’améliorer la qualité et l’espérance de vie du patient.

Le virus de l'hépatite C a été isolé pour la première fois à la fin du 20ème siècle. La médecine distingue aujourd'hui six variantes du virus et plus d'une centaine de sous-types. Déterminer le type de microbe et son sous-type chez l’homme est très important, car ils déterminent l’évolution de la maladie et, par conséquent, les approches de son traitement.

À partir du moment où le virus pénètre pour la première fois dans le sang humain, il s'écoule entre 2 et 20 semaines avant l'apparition des premiers symptômes. Dans plus des quatre cinquièmes des cas, une infection aiguë se développe sans aucun symptôme. Et dans un seul des cinq cas, il est possible de développer un processus aigu avec un tableau clinique brillant, conforme à toutes les règles du transfert de la jaunisse. L'infection chronique touche plus de la moitié des patients, puis se transforme en cirrhose du foie.

Les anticorps détectés à temps contre le virus de l'hépatite C sont capables de diagnostiquer l'infection à son stade le plus primaire et donnent au patient une chance de guérir complètement.

Quels sont les anticorps contre l'hépatite C?

Les personnes qui ne sont pas liées à la médecine peuvent avoir une question naturelle: les anticorps de l'hépatite C, de quoi s'agit-il?

Le virus de cette maladie dans sa structure contient un certain nombre de composants protéiques. Une fois ingérées, ces protéines provoquent la réaction du système immunitaire et la formation d’anticorps dirigés contre l’hépatite C. Différents types d’anticorps sont isolés en fonction du type de la protéine d’origine. Ils sont déterminés en laboratoire à différentes périodes et permettent de diagnostiquer les différents stades de la maladie.

Comment se fait le test des anticorps anti-hépatite C?

Afin de détecter les anticorps anti-hépatite C, une personne est emmenée au laboratoire pour prélever du sang veineux. Cette étude est pratique car elle ne nécessite aucune préparation préalable, sauf pour s'abstenir de manger 8 heures avant l'intervention. Dans une éprouvette stérile, le sang du sujet est stocké, après la méthode de dosage immuno-enzymatique (ELISA), basée sur la connexion antigène-anticorps, les immunoglobulines correspondantes sont détectées.

Indications pour le diagnostic:

• perturbation du foie, plaintes de patients;
• augmentation des indicateurs de la fonction hépatique en analyse biochimique - transaminases et fractions de bilirubine;
• examen préopératoire;
• planification de la grossesse;
• données échographiques douteuses, diagnostic des organes de la cavité abdominale, en particulier du foie.

Mais souvent, des anticorps anti-hépatite C sont retrouvés dans le sang assez accidentellement lors de l'examen d'une femme enceinte ou d'une opération envisagée. Pour une personne, cette information est souvent un choc. Mais ne paniquez pas.

Il existe un certain nombre de cas dans lesquels des résultats de diagnostic faux négatifs et faux positifs sont probables. Par conséquent, après consultation d'un spécialiste, il est recommandé de répéter l'analyse douteuse.

Si des anticorps anti-hépatite C sont détectés, il ne faut pas accorder le pire. Il est nécessaire de demander conseil à un spécialiste et de procéder à des examens supplémentaires.

Types d'anticorps contre l'hépatite C

En fonction de l'antigène auquel ils sont formés, les anticorps anti-hépatite C sont divisés en groupes.

IgG anti-VHC - anticorps de classe G du virus de l'hépatite C

Il s'agit du principal type d'anticorps détecté pour diagnostiquer l'infection lors du dépistage initial chez les patients. «Ces marqueurs de l'hépatite C, qu'est-ce que c'est?» Tout patient demandera au médecin.

Si ces anticorps anti-hépatite C sont positifs, cela signifie alors que le système immunitaire a déjà rencontré ce virus et qu'une forme lente de la maladie peut être présente sans tableau clinique éclatant. Au moment de l'échantillonnage, il n'y a pas de réplication active du virus.

La détection de données d'immunoglobulines dans le sang humain est la raison de l'examen supplémentaire (détection de l'ARN de l'agent pathogène de l'hépatite C).

IgM anti-noyau du VHC - anticorps de classe M aux protéines nucléaires du VHC

Ce type de marqueur commence à apparaître immédiatement après que l'agent pathogène ait pénétré dans le corps humain. Le laboratoire peut être tracé un mois après l’infection. Si des anticorps contre l'hépatite C de classe M sont détectés, la phase aiguë est diagnostiquée. La quantité de ces anticorps augmente au moment de l'affaiblissement du système immunitaire et de l'activation du virus au cours du processus chronique de la maladie.

Avec une diminution de l'activité de l'agent pathogène et le passage de la maladie à la forme chronique, ce type d'anticorps peut ne plus être diagnostiqué dans le sang pendant la recherche.

Total anti-VHC - Total des anticorps anti-hépatite C (IgG et IgM)

Dans les situations pratiques, il est souvent fait référence à ce type de recherche. Les anticorps totaux du virus de l'hépatite C sont la détection des deux classes de marqueurs, à la fois M et G. Cette analyse devient informative après l'accumulation de la première classe d'anticorps, c'est-à-dire 3 à 6 semaines après le fait de l'infection. Deux mois plus tard, en moyenne, après cette date, des immunoglobulines de classe G sont activement produites. Ils sont déterminés dans le sang d'un malade toute sa vie ou jusqu'à l'élimination du virus.

Les anticorps totaux dirigés contre l'hépatite C sont une méthode universelle pour le dépistage primaire de la maladie un mois après l'infection d'une personne.

NS anti-VHC - anticorps contre les protéines non structurales du VHC

Les marqueurs ci-dessus appartenaient aux composés protéiques structuraux de l'agent pathogène de l'hépatite C. Cependant, il existe une classe de protéines appelée non structurelles. Il est également possible de diagnostiquer la maladie du patient. Ce sont des groupes NS3, NS4, NS5.

Les anticorps dirigés contre les éléments NS3 sont détectés dès la première étape. Ils caractérisent l'interaction primaire avec l'agent pathogène et servent d'indicateur indépendant de la présence d'une infection. La conservation prolongée de ces titres dans un volume important peut être un indicateur d'un risque accru d'infection devenant chronique.

Des anticorps contre les éléments NS4 et NS5 sont trouvés dans les dernières périodes de la maladie. Le premier indique le niveau de dommages au foie, le second - sur le lancement de mécanismes d'infection chroniques. Une diminution des titres des deux indicateurs sera un signe positif du début de la rémission.

En pratique, la présence d’anticorps non structurels contre l’hépatite C dans le sang est rarement contrôlée, car cela alourdit considérablement le coût de l’étude. Le plus souvent, des anticorps essentiels contre l'hépatite C sont utilisés pour étudier l'état du foie.

Autres marqueurs de l'hépatite C

En pratique médicale, plusieurs autres indicateurs permettent de juger de la présence du virus de l'hépatite C chez un patient.

ARN VHC - ARN du virus de l'hépatite C

L'agent causal de l'hépatite C - ARN - contenant, par conséquent, il est possible par la méthode PCR avec transcription inverse de procéder à la détection du gène de l'agent pathogène dans le sang ou le biomatériau prélevé d'une biopsie du foie.

Ces systèmes de test sont très sensibles et peuvent détecter même une seule particule du virus dans le matériel.

De cette manière, il est possible non seulement de diagnostiquer la maladie, mais également de déterminer son type, ce qui aide à élaborer un plan de traitement futur.

Anticorps anti-hépatite C: analyse de décodage

Si un patient a reçu les résultats d'un test pour la détection de l'hépatite C par le test ELISA, il peut se demander: des anticorps anti-hépatite C, de quoi s'agit-il? Et qu'est-ce qu'ils montrent?

Dans l'étude du biomatériau de l'hépatite C, les anticorps totaux ne sont normalement pas détectés.

Considérez les exemples de tests ELISA de dépistage de l'hépatite C et leur interprétation:

“VIRUS DE L'HÉPATITE C: antigènes du virus et réponse du système immunitaire du micro-organisme à ceux-ci. Guide méthodologique d'information Guide de Novosibirsk UDC 616.36-002.14: 578.891] -078.33 Virus de l'hépatite C :. "

Virus HEPATITE C:

antigènes viraux et réaction

sur eux le système immunitaire

Virus de l'hépatite C: antigènes du virus et réponse du système immunitaire du microorganisme:

manuel d'information et de méthodologie / L.I. Nikolaev.

- Novosibirsk: «Vector-Best», 2009. 78 p.

Le manuel expose la compréhension moderne de la biologie moléculaire du virus de l'hépatite C (VHC), de ses antigènes et de la défense immunitaire du macro-organisme infecté par ce virus. Les différences dans l'immunité humorale spécifique chez les personnes atteintes d'hépatite C aiguë et chronique, les modifications du contenu en immunoglobulines antivirales au cours d'infections naturellement aiguës et chroniques, ainsi que les particularités de l'immunité humorale spécifique chez les enfants porteurs de marqueurs de l'infection par le VHC sont également prises en compte.

Le manuel est destiné aux employés des instituts de recherche biologique et médicale, aux employés des centres de médecine et de diagnostic et aux étudiants en formation postdoctorale de médecins.

L.I. Nikolaeva - Docteur en sciences biologiques, l'un des principaux chercheurs de l'Institut de recherche en virologie. D.I. Ivanovsky RAMS.

Publié dans l'édition de l'auteur.

© Nikolaev, L.I., 2009 © JSC "Vector-Best", 2009

LISTE DES ABRÉVIATIONS

aco - résidu (s) d’acide aminé ALAT - alanine aminotransférase AIC - cellules présentatrices d’antigène ASAT - aspartate aminotransférase kDa - kilodaltons LDL - lipoprotéines de basse densité VLDL - lipoprotéines de très basse densité MCA - anticorps monoclonaux MHC - complexe majeur d'histocompatibilité NTO - région non traduite OGS - stop première hépatite C RT-PCR - inverse HPV de réaction en chaîne par polymerase de transcription - particules de psevdovirusnye PCR - réaction en chaîne par polymérase CHC - hépatite C chronique THC - lymphocytes T auxiliaires CTL - lymphocytes T cytotoxiques EPR - endoplasmique retirulum

SOMMAIRE

Chapitre 1. VIRUS DE L'HÉPATITE C

1.1. L'organisation du génome du virus

1.2. Structure Virion

Chapitre 2. PRINCIPAUX ANTIGÈNES DU VIRUS HÉPATITE C.

2.1. Structure, fonction et épitopes des glycoprotéines de la coquille

2.2. Antigène de la nucléocapside

2.3. Caractéristiques de la protéine NS2

2.4. Structure, fonction et épitopes de la protéine NS3.

2.5. Les polypeptides NS4a et NS4b et leurs déterminants. 35

2.6 Signification biologique et épitopes des protéines NS5a et NS5b

Chapitre 3. LE ROLE DU SYSTEME IMMUNITAIRE DANS LA LIMITATION DE L’INFECTION PAR LE VHC

3.1. Les principaux facteurs du système immunitaire qui affectent l'élimination du virus dans la phase aiguë de l'infection. _

3.2. Le rôle de la réponse des lymphocytes T dans l'hépatite C

3.3. Réponse humorale aux antigènes de l'hépatite C. 49 3.3.1. Anticorps spécifiques dans la phase aiguë de l'infection. _ 3.3.2. Immunité humorale spécifique dans le cours naturel de l'hépatite chronique C. 55.3.3. Immunité humorale spécifique du VHC chez les personnes qui ont eu une infection aiguë avec rétablissement

3.3.4. Immunité humorale spécifique chez les enfants porteurs de marqueurs d'infection par le VHC

INTRODUCTION

Actuellement, dans la Fédération de Russie, comme dans la plupart des pays, la situation épidémiologique est défavorable en ce qui concerne l'hépatite virale parentérale [1–3]. On s’attend à ce que d’ici 2015-2020 le nombre de personnes infectées dans le monde doublera [2, 3]. Depuis 2001, notre pays a eu tendance à réduire les taux d'incidence de l'hépatite C aiguë (SGH) [1, 4]. Après 2004, la détection des personnes atteintes d'hépatite C chronique (CHC) a commencé à décliner [5, 6].

Cependant, chez les enfants jusqu'en 2006, le nombre de patients atteints d'hépatite C chronique a augmenté [1, 5, 6]. Selon les experts, 1,4 à 2,4% des citoyens de la Fédération de Russie sont infectés par le virus de l'hépatite C (VHC) et la majorité d'entre eux sont déjà atteints d'une forme d'infection chronique [7, 8]. Car CHC est caractérisé par une évolution progressive menant à la formation d'une cirrhose du foie (jusqu'à 30%), d'un carcinome hépatocellulaire primitif (jusqu'à 15%) et de manifestations extrahépatiques (jusqu'à 74%) [9, 10].

Malgré une étude intensive sur l'infection par le VHC, il n'a pas encore été possible d'établir la cause du développement fréquent de la forme chronique de l'infection, d'identifier les caractéristiques de la réponse immunitaire entraînant l'élimination naturelle du virus dans la phase aiguë de l'infection et de créer un vaccin préventif. Il est connu que les antigènes du VHC sont capables d'induire une réponse des cellules B et T, ce qui, chez 15 à 25% des personnes atteintes d'hépatite C aiguë, est suffisant pour éliminer le virus [2, 11]. Mais le plus souvent, la phase aiguë de l'infection devient chronique face à une réponse immunitaire adaptative plus ou moins prononcée [12, 13].

Le virus de l'hépatite C est un agent pathogène unique capable d'éluder le contrôle immunitaire, en créant de nouvelles variantes génétiques et antigéniques, en retardant la formation des réponses T-helper et T-killer dans l'hépatite C aiguë et en provoquant une réinfection chez les personnes guéries. Une étude intensive de l'infection par le VHC a débuté après l'identification de son agent pathogène en 1989 et visait principalement l'objectif principal - la création d'un vaccin préventif [14, 15]. À la fin des années 90, après avoir tenté sans succès de développer un tel vaccin à base de protéines d’enveloppe du VHC recombinantes, l’étude sur l’immunité antivirale portait sur la réponse spécifique des lymphocytes T.

Il convient de noter que l’étude des mécanismes immunitaires protecteurs dans l’hépatite C est en grande partie entravée par l’absence d’un modèle d’infection de laboratoire disponible, le virus n’affectant que les humains et les chimpanzés. Mais, comme le montrent A. Basset et ses co-auteurs, les chimpanzés infectés par le virus présentent une forme plus bénigne de l'infection et le rétablissement se produit plus souvent que chez l'homme [16].

Ce manuel résume les données actuelles sur les antigènes du VHC et discute des possibilités de défense immunitaire du corps humain lors de cette infection. Une attention particulière est accordée à la réponse humorale spécifique, puisque c’est lui qui est sorti du domaine des études intensives. Selon des chercheurs étrangers, cela serait principalement dû à l'absence de méthodes d'analyse des anticorps disponibles pour séparer les antigènes du VHC (individuels) [17]. Depuis 1998, des systèmes de test d'immunoferment ont été fabriqués dans notre pays pour analyser les immunoglobulines d'antigènes individuels du VHC, ce qui a permis aux spécialistes nationaux d'obtenir des informations précieuses sur les caractéristiques de la réponse humorale aux protéines virales.

6 Chapitre 1. VIRUS DE L'HÉPATITE C

1.1. Organisation du génome du virus En 1989-1990, grâce au développement de méthodes génétiques moléculaires, le clonage et l'isolement du génome du VHC, puis du virus lui-même, dont l'existence avait été prédit, sont devenus possibles [14, 15, 18, 19]. Les caractéristiques de l'organisation du génome du VHC ont permis de l'inclure dans la famille des Flaviviridae dans le nouveau genre Hepacivirus, dont les membres sont ensuite devenus d'autres virus [15, 20, 21]. Le génome du VHC est représenté par l'ARN simple brin, qui a une polarité positive et contient environ 9400 à 9600 résidus de nucléotides. Elle se caractérise par un cadre de lecture ouvert unique, des régions non traduites à 5 et 3 bornes (UTR) courtes et des zones à taux de mutation élevé [21, 22].

Un cadre de lecture ouvert code pour un précurseur de protéine unique, appelé polyprotéine, qui se compose de 3008 à 3037 résidus d’acides aminés (aco) [23]. Suite au clivage protéolytique co-et post-traductionnel de la polyprotéine et au traitement des produits, des protéines structurelles et non structurelles sont formées. La disposition des antigènes viraux dans la polyprotéine, les sites d'action des protéases et le degré d'homologie entre les différents isolats du virus sont présentés à la Fig. 1 [24].

En raison de la diversité génétique du VHC au début des années 90, il était difficile de classer ses isolats. En 1994, lors de la IIe Conférence internationale sur l'hépatite C et le virus associé, un accord fut conclu pour baser la classification du virus sur la région du génome codant pour la protéine NS5b [25]. En conséquence, 6 génotypes et environ 80 sous-types de VHC ont été isolés.

(5-NTO) * (3-NTO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% Fig. 1. Schéma de la localisation des antigènes viraux dans la polyprotéine [24]. Les sites d'action des protéases cellulaires sont indiqués par les flèches ci-dessus, pour la sérine protéase du VHC - d'en bas. La région clivée par la protéase virale NS2 / NS3 est marquée d'un astérisque.

Vous trouverez ci-dessous le pourcentage d'homologie entre les isolats de virus, en tenant compte de la NTO.

Les génotypes principaux sont homologues à 65–70%, les sous-types (sous-types) à 77–80% et les variants génétiques au sein d'un isolat à 95–97%. Plus tard, en 2005, un groupe d'experts a clarifié la classification du VHC [26]. Il est recommandé de conserver le terme "génotype" à la place du "Clyde" proposé par certains chercheurs. Lors du typage des isolats de virus, il convient d'analyser la région du génome noyau / El, NS5b et de déterminer la séquence nucléotidique de l'ARN du virus complet si l'on soupçonne une recombinaison [27]. Il a été proposé de classer tous les isolats du VHC connus à ce jour en six génotypes et de considérer les génotypes 7 à 10 introduits par certains chercheurs en tant que sous-types.

La région la plus conservée de l'ARN du VHC est la NTO à 5 extrémités - environ 92% d'homologie [22]. Grâce à cette région conservatrice, il est devenu possible de détecter l'ARN viral dans différents isolats par la méthode de RT-PCR (réaction en chaîne de la polymérase en transcription inverse) [28, 29]. Dans un organisme infecté, le VHC existe sous forme d'un ensemble de variants génétiquement hétérogènes, mais étroitement apparentés, appelés quasi-espèces, dont les différences dans la séquence de nucléotides représentent quelques pour cent [30].

Au cours du processus infectieux, le virus est soumis à une pression immunitaire: certaines variantes du VHC sont éliminées par le système immunitaire de l'hôte, tandis que d'autres apparaissent [31, 32]. De nouvelles variantes du virus apparaissent en raison de l'absence d'ARN-polymérase de VHC et d'ARN-polymérase, corrigeant l'activité de la 3-5-exonucléase [33]. Par conséquent, les erreurs qui se produisent lors de la réplication de l'ARN viral ne sont pas éliminées.

La plupart des modifications de la séquence nucléotidique de l'ARN du VHC se retrouvent dans les sites dits synonymes, mutations qui n'affectent pas les propriétés biologiquement importantes du virus. La comparaison de sites synonymiques vous permet de définir la divergence des variantes appariées du virus. Ainsi, dans l’étude des isolats de VHC isolés sur divers territoires, il a été constaté que la pénétration du virus dans la population humaine s’est probablement produite il ya environ mille ans [34, 35].

Le premier élément du génome du VHC, l'UTR à 5 extrémités, consiste en 341 résidus de nucléotides et remplit d'importantes fonctions biologiques. Cette région fournit l'interaction de l'ARN viral avec la sous-unité 40S du ribosome, formant une structure complexe du site de liaison, mentionnée dans l'abréviation anglaise IRES (internal ribosome entry site) [36]. L'IRES HCV a une structure spatiale complexe (Fig. 2) [37, 38].

- 480 60– 140– 440– 5 –500

Fig. 2. Le schéma de la structure secondaire de l'IRES avec les quatre domaines principaux (I à IV), pseudo-nœuds, codons principal (1) et additionnel (2) est donné avec de légères modifications par rapport à l'article D.M. Forton et al. [38].

Après la liaison de l'IRES du HCV à la sous-unité 40S du ribosome, la formation d'un complexe de traduction actif et la traduction du génome viral commencent par un mécanisme indépendant de la casquette [37, 39]. Pour initier la traduction, le codon AUG en position 342 est utilisé (figure 2). Il a été établi que l'interaction de l'ARN du virus et de la sous-unité 40S du ribosome dans ce dernier conduit à des changements conformationnels complexes, ce qui est un processus unique [40].

Pour la traduction du génome du VHC, les facteurs d'initiation cellulaire usuels (canoniques) eIF2 et eIF3 sont nécessaires. Comme le complexe de traduction actif se forme lentement, le taux de traduction initial est faible, mais il augmente lorsque la chaîne plus de l'ARN interagit avec des protéines activatrices non canoniques de la cellule, telles que l'antigène La, la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène L, la protéine ribosomale rpS5 et plusieurs autres protéines cellulaires non identifiées [41–44 ].

La capacité de l'IRES du VHC à se lier au ribosome peut inhiber certaines protéines cellulaires, certains peptides et la vitamine B12 [45-49].

Les ARN courts complémentaires de l'IRES, appelés ARN interférents courts, se lient à celui-ci et arrêtent la traduction du génome viral [50]. Il a été démontré que l'effet antiviral des interférons alpha, bêta et gamma apparaît également au niveau de la traduction induite par l'IRES [51]. On a constaté que le VHC avait des différences spécifiques à certains tissus dans la structure de l'IRES [38, 52, 53]. Il est possible que ce soit l’un des moyens d’assurer la persistance du virus dans les cellules de nombreux tissus.

Au cours du processus de réplication du génome du VHC, l'ARN se forme avec une polarité négative, appelée chaîne négative de l'ARN. Il est instable et se décompose en enzymes cellulaires (près de 60% en 30 minutes) [54]. Dans une cellule infectée, le rapport des chaînes plus et moins d'ARN est de 10: 1 [55]. Pour une réplication efficace du génome viral, une protéine cellulaire PTB (protéine de liaison au tractus polypyrimidine) qui se lie au tractus ARN de la polypyrimidine est nécessaire [56]. Des expériences sur modèles ont montré qu'environ 1 000 copies des chaînes plus d'ARN et environ 100 copies des chaînes négatives d'ARN sont formées dans une cellule infectée par jour [57].

L'élément final du génome, l'UTR 3-terminale, est impliqué dans l'initiation de la réplication (le site d'initiation est situé dans la chaîne négative de l'ARN), dans la régulation de la traduction et la stabilisation de l'ARN génomique [41, 59–61]. La structure de l'UTR à 3 terminaux comprend trois éléments:

1) une courte section avec une séquence variable constituée de 40 résidus de nucléotide, 2) un tract polyuridine contenant 36 résidus d'uridine ou plus, et 3) une région conservatrice unique de X constituée de 98 nucléotides [60]. La région X a une structure secondaire complexe dans laquelle une épingle à cheveux longue et deux épingles courtes sont distinguées [61]. Il a été établi que cette région est directement impliquée dans la formation d'un complexe réplicatif, la régulation de l'initiation de la traduction et sa réplication [41, 62, 63].

1.2. Structure du virion Lors de premières expériences de filtration du VHC sur des filtres de différents diamètres de pores, il a été montré que le virion avait une taille de 30 à 60 nm, ce qui coïncidait avec les résultats de l'analyse au microscope électronique du virus dans des échantillons biologiques [64, 65]. Au début des années 90, des particules d'ARN ont été isolées du sérum sanguin de personnes atteintes d'hépatite C et se sont concentrées au cours de l'ultracentrifugation sur gradient dans cinq zones de densité comprise entre 0,95 et 1,21 g / ml [66-68]. Chacune de ces zones a été utilisée pour infecter les chimpanzés [68]. Et il s'est avéré que la zone avec une densité de 0,95 à 1,10 g / ml avait l'infectivité maximale. Cette densité inhabituellement faible de particules virales s'explique par l'association du VHC avec des lipoprotéines de basse densité (LDL) et de très faible densité (VLDL) sériques [19, 66].

Les lipoprotéines sont des particules sphériques formées par une monocouche de phospholipides avec des inclusions de cholestérol et des apolipoprotéines B et E, la cavité interne des particules est remplie de triglycérides [69]. La fonction principale des lipoprotéines est la libération de triglycérides et de cholestérol dans diverses cellules. La synthèse des lipoprotéines a lieu lors du retrait endoplasmique (RPE) des hépatocytes, où elles interagissent vraisemblablement avec l'enveloppe protéine-lipide du VHC, formant un complexe [70]. Les sites de l'enveloppe du VHC responsables de la formation du complexe viral avec LDL / VLDL n'ont pas encore été établis. Ce complexe s'appelle des particules de lipovirus. Les virions du complexe sont protégés des anticorps neutralisant les virus et peuvent pénétrer dans les hépatocytes en utilisant le récepteur des LDL [68]. Environ 75% des lipoprotéines circulant dans le sang retournent aux hépatocytes via un récepteur spécial des LDL; le reste pénètre dans les hépatocytes différemment. Il a été établi qu'environ 20% des virions ne sont pas associés aux lipoprotéines sériques [71].

Recherche de la résistance du VHC aux solvants organiques, A.M. Prince et ses collaborateurs ont montré que le virus possède une membrane lipidique / protéique formée par les lipides de la cellule hôte et les protéines de surface du virus [72]. Au cours des années suivantes, la structure du VHC a été affinée à l'aide d'une analyse au microscope électronique à haute résolution de biopsies du foie de patients atteints d'hépatite C et de particules artificielles de type virus (HPV). Les HPV sont formés après l'expression d'un fragment du génome du VHC (appelé réplicon) dans divers vecteurs. Les virus de la stomatite vésiculeuse, les virus de la vaccine et les baculovirus ont été utilisés comme vecteurs [73–75]. Lorsque la séquence nucléotidique codant pour les protéines d'enveloppe du VHC a été incluse dans le génome du rétrovirus (VIH ou virus de la leucémie de souris), des particules de pseudovirus (HPV) ont été obtenues dans l'enveloppe contenant les protéines El et E2 du VHC, et tous les autres éléments de particules étaient rétroviraux [76, 77 ]. L'utilisation du HPV a facilité l'étude de la morphologie et de l'assemblage du VHC, ainsi que l'étude des propriétés de ses protéines. On a notamment déterminé les dimensions du virion, dont le diamètre était de 50 nm, ce qui correspond aux données modernes obtenues dans l’étude du virus natif isolé de patients atteints d’hépatite C [78, 79].

Sur la fig. La figure 3 montre la micrographie électronique du HPV obtenue à l'aide d'un microscope électronique à transmission [79].

Fig. 3. Micrographie électronique avec contraste négatif de HPV [79].

En bas à gauche, avec un grossissement plus élevé, un seul virion avec des protéines de surface saillantes en forme de T est représenté.

Sous l'enveloppe du VHC se trouve la nucléocapside, qui est formée par la protéine centrale (noyau) et contient l'ARN viral (Fig. 4). La taille de la nucléocapside, déterminée par analyse au microscope électronique de particules virales non façonnées, est comprise entre 33 et 40 nm [74].

Jusqu'à présent, il n'a pas été possible d'isoler le VHC en quantité suffisante pour permettre son étude détaillée, ni chez les personnes malades, ni chez les chimpanzés. Cela est dû à la faible teneur en virus, à son hétérogénéité et à sa capacité à former des complexes avec des anticorps et des lipoprotéines sanguines. Le premier rapport sur la culture du VHC dans des cultures de cellules transplantables a été fait par P.G. Deryabin et co-auteurs en 1997 [81]. En 2005, quatre groupes de chercheurs ont publié des données expérimentales sur l'expression du virus dans des cultures de cellules transplantées lors de la production de particules virales infectieuses [82–85].

La morphogenèse du VHC est réalisée dans les membranes de la retraite endoplasmique, les vacuoles de l'appareil de Golgi et le cytoplasme de la cellule. Les protéines structurelles du virus sont clivées de la polyprotéine par des enzymes cellulaires (signal peptidases et peptide peptidases). La protéine centrale reste sur la surface cytoplasmique de la RPE et dans les vacuoles lipidiques du cytoplasme, et les protéines de l’enveloppe pénètrent partiellement dans la cavité interne de la RPE.

Dans le réticulum endoplasmique, les protéines El et E2 forment un complexe et subissent un traitement qui aboutit probablement aux vacuoles sécrétoires de Golgi. La nucléocapside après le conditionnement de l'ARN est recouverte d'une coquille et le virus est extrudé dans des citernes ESR. D'après les résultats de l'analyse d'échantillons de biopsie du foie chez des patients atteints de CHCV, V. Falcon et ses coauteurs ont suggéré que les phases finales de la morphogenèse du virus se produisent dans les structures vésiculaires du cytoplasme de type EPR [86]. Les particules virales formées quittent la cellule dans le cadre de vacuoles sécrétoires [87].

Le taux de formation de virions chez les patients présentant une infection chronique par le VHC peut atteindre 1012 particules par jour, et la demi-vie des virions dans le sang est d'environ 3 heures [88].

Chapitre 2. PRINCIPAUX ANTIGÈNES DE L'HÉPATITE DU VIRUS AVEC LES PRINCIPALES protéines du VHC sont les protéines d'enveloppe E1 et E2, les protéines de nucléocapside et non structurelles NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b.

En plus d'eux, des polypeptides mineurs sont également transmis à partir du génome viral: le peptide p7, la protéine F et un polypeptide peu étudié avec une masse moléculaire d'environ 8 kDa [89].

Les deux dernières protéines mineures sont synthétisées à la suite de la lecture d'informations génétiques à partir de codons d'initiation supplémentaires situés dans la région du génome qui code pour la protéine noyau [22]. Il a été établi qu'un polypeptide peu étudié ayant une masse moléculaire d'environ 8 kDa est lu à partir du codon 2 (voir la figure 2). La disposition des protéines du VHC dans la membrane de RPE est illustrée à la Fig. 5

Le peptide P7, également appelé viroporine du VHC, forme des heptamères qui forment un canal spécifique aux cations, dont la signification dans la biologie du virus n'a pas encore été complètement élucidée [91]. On suppose qu'il est impliqué dans les premiers stades de la morphogenèse du virus. L'effet du peptide p7 sur les propriétés infectieuses du VHC a récemment été démontré [92].

La protéine F est synthétisée en décalant le cadre de lecture du code génétique d’un résidu de nucléotide (un nouveau codon d’initiation part du 341 e résidu de nucléotide, voir la Fig. 2) et a

Figure EPR de la cavité. 5. La disposition des protéines du VHC dans la membrane de la RPE est donnée avec de légères modifications par rapport à l'article de B. Lindenbach et C.M. Riz [90].

séquence conservative d'acides aminés [93, 94]. On a émis l'hypothèse que cette protéine serait impliquée dans le développement d'une infection persistante par le VHC [94, 95]. Il existe peut-être un lien entre l'apparition de la protéine F et la stéatose du foie dans l'hépatite C chronique. Il a été démontré que les anticorps anti-cette protéine ne sont détectés que chez 10% des patients atteints d'hépatite C chronique, mais s'ils développent une stéatose du foie, le taux de détection de ces anticorps est multiplié par trois [96]. Actuellement, une étude intensive des fonctions biologiques des protéines mineures du VHC est en cours.

2.1. Structure, fonctions et épitopes des glycoprotéines enveloppées Les protéines d’enveloppe E1 (aco 192–383) et E2 (aco 384–746) sont des fragments de polyprotéines situés derrière la protéine centrale (core) (voir Fig. 1) [97, 98]. Selon l'analyse électrophorétique, la masse moléculaire de la protéine El est de 31 kDa, E2 - 70 kDa. Les deux protéines appartiennent aux protéines transmembranaires et contiennent des résidus d'hydrate de carbone [97]. Les principales fonctions de ces protéines

- interaction avec les récepteurs et garantie de la pénétration du génome viral dans le cytoplasme de la cellule.

La biosynthèse des protéines du VHC est réalisée sur des ribosomes associés à la RPE. Grâce à un signal de translocation spécial, une grande partie de la région polyprotéique correspondant aux protéines El et E2 pénètre dans la cavité des réservoirs de RPE. Là, les peptidases de signal cellulaires coupent ces protéines les unes des autres, ainsi que de la protéine centrale [62, 97–99]. (Les sites d'action des peptidases sont illustrés à la figure 1.) Après cela, les protéines d'enveloppe du VHC restent liées aux membranes de RPE en raison des régions transmembranaires localisées au niveau des régions COOH-terminaux de leurs chaînes polypeptidiques [99, 100].

Le processus complexe de repliement spatial des protéines E1 et E2 commence simultanément avec la traduction et s’achève après celle-ci. Les principales étapes du repliement de la protéine E1 sont réalisées pendant 1 h à l'aide de la protéine cellulaire chaperone, la calnexine, qui forme avec elle un complexe à court terme [101, 102]. Avec la participation de la calnexine, quatre liaisons disulfure (S-S) sont formées à partir de huit résidus de cystéine de la glycoprotéine E1. En une heure de plus, la structure spatiale de la glycoprotéine E1 se stabilise [103].

Le repliement de la protéine E2 est plus long (environ 4 heures) que celui de la protéine El.

Evidemment, cela est dû à la présence de 18–20 résidus de cystéine dans la molécule, qui peuvent former 9–10 liaisons disulfure, et à la glycosylation intensive de la protéine E2 [104]. Le repliement spatial de la protéine E2 se produit avec la participation de la calnexine et des chaperons non encore identifiés, ainsi que de la protéine E1 [103, 104].

On suppose qu’à la fin de celle-ci, 8 à 9 liaisons disulfure se forment dans les limites d’un polypeptide et d’une liaison S-S entre deux polypeptides E2 - E2 dans sa protéine E2.

Le complexe de protéines de l'enveloppe E1 - E2 est formé sans apparition de liaisons covalentes [103-105]. La stoechiométrie de ce complexe n'a pas encore été établie, la protéine E2 étant probablement le composant prédominant [104]. Le repliement des protéines et la formation d'un complexe de glycoprotéines en coquille ne se produisent pas toujours correctement. Les protéines E1 et E2 mal assemblées, ainsi que leurs complexes, se retrouvent dans les réservoirs de RPE sous la forme d'agrégats à haut poids moléculaire [105].

Sous l'action des enzymes cellulaires du réseau EPR, les protéines E1 et E2 sont glycosylées, formant ainsi le noyau dit de chitobiose [97].

Le processus de glycosylation commence simultanément avec le repliement des protéines et se termine dans les vacuoles de l'appareil de Golgi. La glycosylation assure un bon repliement spatial, la formation d'une structure antigénique spécifique et l'apparition d'une activité biologique dans les glycoprotéines de la coquille. De plus, après glycosylation, les protéines El et E2 peuvent être sécrétées par les cellules et sont mieux protégées de certaines enzymes protéolytiques de la cellule.

Les deux glycoprotéines du VHC appartiennent à des protéines transmembranaires de type I, caractérisées par la présence de l'ectodomaine terminal NH2 (la partie de la protéine exposée de la bicouche lipidique de l'enveloppe virale) et de la région transmembranaire COOH-terminale. Dans les protéines E1 et E2, un ou deux brins transmembranaires impliqués dans la formation du complexe E1 - E2 et retenant les glycoprotéines dans la bicouche lipidique de l'enveloppe virale ont été découverts [106-108].

Récemment, les scientifiques ont accordé beaucoup d’attention à la recherche de glycoprotéines d’enveloppe du VHC d’un peptide de fusion (peptide de fusion), qui combine les bicouches lipidiques de l’endosome et le virus. Pour le VHC, un modèle de pénétration dans la cellule (qui a déjà été partiellement confirmé) a été proposé par analogie avec le processus caractéristique du virus de l'encéphalite à tiques. Selon ce modèle, lors du contact du VHC avec le récepteur, un complexe virus-récepteur se forme qui, sous la forme d'une endocytose, des vacuoles pénètrent dans la cellule (ce processus est également appelé endocytose à médiation par un récepteur). À l'étape suivante, l'endocytose vacuole se confond avec l'endosome (structure cellulaire vésiculaire cytoplasmique), caractérisée par des valeurs de pH faibles. Sous l'action de l'environnement acide de l'endosome, les glycoprotéines de surface du VHC subissent des changements de conformation conduisant à l'exposition et à l'incorporation du peptide de fusion dans la membrane endosomale. Ce processus déclenche la fusion de la bicouche lipidique du virus et de la membrane de l'endosome, qui se termine par la libération de l'ARN du VHC dans le cytoplasme de la cellule.

Jusqu'ici, il n'a pas été établi dans laquelle des deux glycoprotéines d'enveloppe du VHC se trouvait le peptide de fusion. Il existe plusieurs hypothèses sur sa localisation dans la protéine E1: sur le site avec les résidus d’acides aminés 265 à 287, ou 272 à 281, ou 275 à 293 [107, 109]. Des similitudes ont été trouvées dans la structure primaire du peptide putatif de la fusion du sous-type 1a du VHC (Aco 265–287) avec des peptides similaires chez certains membres de la famille des Flaviviridae (Fig. 6) [109].

Dans la glycoprotéine E1 du VHC, quatre sites de N-glycosylation ont été identifiés: il s'agit des résidus aspartiques situés aux positions 196, 209, 234 et 305 [110-112]. En utilisant la méthode des mutations ponctuelles dans la région de l’ARN viral codant pour la protéine E1, il a été possible de montrer que la disparition des sites de glycosylation en position 209 et 234 n’affecte pas la formation du complexe E1 - E2 [110, 113]. Résidus d'oligosaccharides

Fig. 6. La structure primaire du peptide de fusion chez des membres individuels de la famille des Flaviviridae [109].

TBE - virus de l'encéphalite transmise par les tiques, HLV - virus de la fièvre jaune, WNE - virus de l'encéphalite japonaise, VDEN - virus de la dengue, KUNV - virus Kunyan, VNV - virus du Nil occidental. Les résidus d’acides aminés communs avec le VHC (2 glycine et 2 cystéine) sont soulignés, les résidus d’acides aminés ayant des propriétés physico-chimiques similaires sont mis en évidence en italique.

aux positions 196 et 305 sont nécessaires au bon repliement spatial de la protéine E1, ainsi qu’à la formation du complexe E1 - E2 de glycoprotéines. De plus, il a été démontré que les résidus glucidiques aux positions 196 et 209 de la glycoprotéine E1 sont nécessaires pour préserver l'infectivité du virus [112].

Sur la fig. La figure 7 montre un modèle hypothétique du repliement spatial de la protéine E1, calculé selon une analyse protéomique, une simulation sur ordinateur et une analyse comparative avec la protéine d'enveloppe E du virus de l'encéphalite à tiques.

Les chaînes oligosaccharidiques des glycoprotéines du VHC se composent le plus souvent de 6 à 9 résidus de mannose liés à deux résidus de N-acétylglucosamine [114, 115]. Seule la protéine E2 possède un type plus complexe d'oligosaccharides comportant un plus petit nombre de résidus de mannose, qui remplace partiellement le fucose, et les résidus de N-acétylglucosamine se trouvent en position terminale de la chaîne d'oligosaccharides [115].

Dans la glycoprotéine E2, 11 sites de glycosylation ont été trouvés pour les résidus aspartiques aux positions 417 (1), 423 (2), 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8). ), 576 (9), 623 (10) et 645 (11) [111, 112, 115].

Il a été démontré que le complexe de glycoprotéines E1 - E2 ne se forme pas si

Fig. 7. Le schéma de la structure spatiale estimée de la protéine E1 est présenté dans une légère modification de R.F. Garry et S. Dash [107].

Légende: harnais - chaîne polypeptidique, cylindres - hélice alpha, flèches - structure bêta, tridents - chaînes oligosaccharidiques, segments noirs - liaisons disulfure.

pas de chaîne oligosaccharidique en position 10 de la protéine E2 du VHC.

Un virus perd son pouvoir infectieux si la glycoprotéine E2 ne contient pas de résidus glucidiques aux positions 1, 2, 4, 8, 10 et 11 [111]. De plus, il a été constaté que les chaînes oligosaccharidiques aux positions 1, 6 et 11 sont impliquées dans la formation d'épitopes sur lesquels des anticorps neutralisants sont formés [108, 116].

On a constaté que les virus des sous-types 1a et 3a différaient par le nombre de chaînes d'oligosaccharides dans les protéines de l'enveloppe [117]. Dans la glycoprotéine E2, contrairement à la protéine E1, il existe des résidus d'oligosaccharide modifiés aux positions 423 et 430 [115, 116].

La glycoprotéine E2 se prête mal à l’étude des méthodes physico-chimiques d’analyse de la structure des protéines, principalement en raison du grand nombre de résidus de glucides. L'abondance des chaînes d'oligosaccharides dans la glycoprotéine E2 rend difficile l'obtention d'un cristal de protéine pour l'analyse par diffraction des rayons X et pour la réalisation d'une résonance magnétique nucléaire. Par conséquent, un modèle de structure secondaire a été créé pour la forme raccourcie (ectodomaine) de la protéine E2 à l'aide de programmes informatiques prédictifs du repliement des protéines et d'une analyse comparative des protéines de la coquille de la famille des Flaviviridae déjà étudiées [112]. L'ectodomaine est un fragment de la glycoprotéine E2 (aco 384–660) sans sa partie transmembranaire, qui possède de nombreuses propriétés biologiques inhérentes à la protéine E2 de taille normale. Il peut former un complexe avec la glycoprotéine E1, interagir avec des anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes conformationnels de la protéine E2, ainsi qu'avec l'héparinsulfate et certains récepteurs cellulaires.

Dans ce modèle spatial de l'ectodomaine de la glycoprotéine E2 proposé par A.T. Yagnik et ses co-auteurs ont révélé une faible teneur en éléments de la structure secondaire (environ 37%) et une prévalence de sites désordonnés [113]. Les éléments de la structure secondaire sont principalement représentés par des sections pliées en bêta et plusieurs courts fragments alpha-hélicoïdaux. C’est le premier, et jusqu’à présent, le seul modèle de la glycoprotéine E2, qui reflète évidemment sa structure secondaire réelle avec une certaine approximation. Compte tenu de la complexité et de l'ambiguïté de ce modèle, celui-ci n'est pas clairement représenté.

L'une des principales caractéristiques de la structure primaire de la protéine E2 est la présence de sections à séquence d'acides aminés non constante, appelées variables et hypervariables [118, 119]. Trois sites présentant une très haute fréquence de substitutions d'acides aminés ont été trouvés dans la protéine E2: il s'agit de régions hypervariables (HWR). Le premier HVR est localisé dans la partie NH2-terminale de la protéine E2 sur le site avec les résidus d’acides aminés 384–411, le deuxième HWR - sur le site contenant les résidus 474–482 et le troisième, récemment découvert, sur le site contenant les résidus 431–466 ou 434–450 [120– 122].

Il est établi que le premier REO, malgré la fréquence élevée des substitutions d’acides aminés, conserve toujours le profil de charge positive totale et le profil stable d’hydrophilie / hydrophobie.

De plus, ses quatre résidus d’acides aminés aux positions 385, 389, 406 et 409 sont très conservateurs, à savoir. ils sont très fréquents dans les isolats étudiés du VHC [123, 124]. Toute la variété des variantes des séquences d'acides aminés du premier REH peut être réduite à une séquence consensus, composée des résidus d'acides aminés les plus courants dans chacune des 27 positions (384 à 411) de cette partie de la protéine E2 [124, 125]. Le rôle biologique du premier HVR est de fournir les premières étapes de la sorption du VHC à la surface des cellules et de présenter la «cible glissante» au système immunitaire, formé par de nouveaux variants antigéniques en constante évolution de cette région de la protéine E2 [31, 123, 126].

Il existe des preuves que les deuxième et troisième HVR sont impliqués dans la liaison du VHC aux récepteurs cellulaires [121, 127].

En raison de la variabilité en acides aminés des trois régions hypervariables de la glycoprotéine E2, des variants dits "d'échappement" du virus se forment, à savoir. ceux pour lesquels il n'y a actuellement aucune réponse immunitaire.

Une autre caractéristique de la protéine de coque E2 est la présence de sites de chaîne polypeptidique similaires à d'autres protéines.

Ce phénomène s'appelle le mimétisme moléculaire. Ainsi, douze résidus d’acides aminés conservateurs (positions 660 à 671) de la protéine E2 forment le domaine PEHD identique au site de phosphorylation dans le facteur d’initiation de la traduction ribosomale eIF2a [128]. En raison de cette similitude, le VHC peut arrêter l’effet antiviral de l’IFN-alpha. Après activation de l'interféron alpha, la protéine kinase R devrait phosphoryler le facteur eIF2a, ce qui à son tour conduirait à l'arrêt de la traduction de l'ARN du VHC. Mais la protéine E2, utilisant le domaine RephD, interagit avec la protéine kinase R au lieu du facteur eIF2a, et la biosynthèse des protéines virales se poursuit [129].

Dans la partie NH2-terminale de la protéine E2, un mimétisme moléculaire a été trouvé avec des zones des chaînes légères et lourdes des immunoglobulines et avec un récepteur des cellules T [118]. On pense que cette similarité structurelle pourrait être à l'origine du développement de troubles auto-immuns chez les patients infectés par le VHC, tels que la cryoglobulinémie mixte de type II et le lymphome à cellules B non hodgkinien [130].

Comme mentionné ci-dessus, les protéines d'enveloppe du VHC assurent l'interaction du virus avec les récepteurs cellulaires. Il a été établi que les résidus oligosaccharidiques de ces glycoprotéines enveloppées peuvent jouer un rôle clé dans la liaison du virus à ses récepteurs potentiels tels que DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) et le récepteur de l'asialoglycoprotéine [117, 131, 132]. Les deux premiers récepteurs potentiels sont des lectines de type C et fonctionnent comme des molécules adhésives de surface fournissant des contacts cellulaires entre les cellules dendritiques, endothéliales et les cellules T. Les récepteurs L-SIGN sont présents à la surface des cellules endothéliales des sinusoïdes du foie et des ganglions lymphatiques, et des DC-SIGN sont présents à la surface des cellules dendritiques. Ces récepteurs contiennent une région spéciale de reconnaissance des glucides dépendant du calcium du CRD (domaines de reconnaissance des glucides), qui peut se lier aux résidus glucidiques des protéines E1 et E2 [117, 131]. Comme les récepteurs DC-SIGN et L-SIGN ne se trouvent pas dans les hépatocytes, ils ne peuvent pas être considérés comme les cibles principales du VHC. Ces récepteurs capturent, accumulent le virus et le transmettent aux lymphocytes T et éventuellement aux hépatocytes.

Le récepteur de l'asialoglycoprotéine est présent à la surface des cellules du foie et assure la pénétration de glycoprotéines dans celles-ci, qui ne présentent pas de résidu d'acide sialique à l'extrémité des chaînes glucidiques. Ce récepteur est spécifiquement associé aux protéines El et E2 recombinantes, obtenues par expression des fragments d'ARN du HCV correspondants dans des cellules d'insecte [132].

Il a été établi que la protéine E2 recombinante interagit avec un autre récepteur viral potentiel (ou co-récepteur), la protéine transmembranaire CD81 [133]. Ce récepteur est présent à la surface de la plupart des cellules (à l'exception de l'érythro et des plaquettes) et est impliqué dans les fonctions cellulaires associées à l'adhérence, la motilité, l'activation du métabolisme et la transformation. Le CD81 appartient au groupe de protéines tétraspanine et a une structure caractéristique: 4 brins transmembranaires et grandes et petites boucles extracellulaires. La grande boucle extracellulaire CD81 s’est révélée se lier spécifiquement à la protéine virale recombinante E2 [133].

Dans le modèle A.T. Yagnik et ses co-auteurs dans cette interaction participent à deux aires de surface de la protéine E2 avec aco 474–494 et 522–551 [112]. Toutefois, dans une étude ultérieure, il a été constaté que les résidus d’acides aminés de la protéine E2 aux positions 420, 527, 530 et 535 entraient en contact avec la grande boucle de CD81 [134].

Des expériences avec HPV, HPV et le virus natif du sérum de patients atteints de CHC ont confirmé que CD81 est impliqué dans le processus de pénétration du VHC dans la cellule, mais en dehors de cela, une autre protéine stimulant l'endocytose est nécessaire [77, 78, 134]. Avec CD81 et cette protéine, les virions non associés aux lipoprotéines vont pénétrer dans la cellule, car le contact de la glycoprotéine virale E2 et CD81 est nécessaire. On sait que la teneur en tels virions est d’environ 20% (voir section 1.2). Les virions qui ne sont pas associés aux lipoprotéines peuvent pénétrer dans la cellule par cette voie, car la formation du complexe du VHC avec eux empêche apparemment le contact de la glycoprotéine E2 avec le récepteur CD81.

Jusqu'à 80% du VHC se trouve dans le corps des personnes infectées sous la forme d'un complexe avec des lipoprotéines (appelées particules de lipovirus). Ces particules pénètrent dans les cellules en utilisant le récepteur des LDL (voir section 1.2) et un autre récepteur du SR-BI (également appelé Cla-1) [126]. Le récepteur SR-BI se trouve à la surface de nombreuses cellules, mais son contenu le plus élevé se trouve dans le foie et les tissus stéroïdogènes. La fonction principale de ce récepteur est de libérer les lipides qui composent la lipoprotéine de haute densité dans les cellules. Le récepteur SR-BI fait référence à des protéines transmembranaires. Il possède deux brins membranaires, une grande boucle extracellulaire et deux courts sites cytoplasmiques dans les régions NH2 et COOH-terminales [135]. Il a été établi que le premier REH de la protéine E2 recombinante, HPV, et le virus obtenu à partir d'une culture cellulaire peuvent être associés à ce récepteur [136–138]. Cependant, le VHC du sérum de personnes atteintes d'hépatite C interagit avec le récepteur SR-BI sans la participation des premiers protéines HWR et E2 [118].

Pour expliquer ce phénomène, il a été suggéré que le virus pénètre dans la cellule en utilisant un complexe récepteur à plusieurs composants formé par CD81-SR-BI [77, 138].

On sait que les chaînes glucidiques chargées négativement des glycoprotéines de surface d'une cellule peuvent servir de sites de liaison primaires pour divers virus [139]. En raison de ce processus, le contenu viral à la surface de la cellule augmente et la probabilité de son interaction avec un récepteur spécifique augmente. Des expériences sur la liaison du VHC aux cultures de cellules hépatiques ont montré que ce processus peut être bloqué par l'héparine et la suramine, qui ont une charge négative [140]. Le site avec lequel l'héparine se lie spécifiquement est présumé être localisé dans le premier HVR de la glycoprotéine E2 et / ou dans la zone avec AKO 559–614, où une teneur élevée en résidus d'acides aminés chargés positivement a été détectée [112, 126]. Cependant, dans des expériences sur des particules de pseudo-virus de HCV, il n'a pas été possible de détecter l'interaction de la protéine E2 avec l'héparine [141]. De toute évidence, l’implication des glucosaminoglycanes dans le processus complexe d’entrée du VHC dans la cellule nécessite des études complémentaires.

Comme l'ont montré des études au cours de la dernière décennie, le VHC présente un tropisme cellulaire important. Le virus se réplique dans les hépatocytes, les cellules mononucléées périphériques et ascitiques, les lymphocytes et les monocytes [142-144], les cellules dendritiques [52, 145], les cellules progénitrices hématopoïétiques [146], la microglie [38], les cardiomyocytes [147], l'épithélium intestinal [147], 148], ostéoblastes [149] et follicules à cellules B des ganglions lymphatiques [150]. C'est probablement pourquoi il existe plus d'un récepteur pour le VHC.

Lors de l’étude des protéines de coque, une grande attention est accordée à l’analyse de leurs propriétés antigéniques et immunogènes, ces informations étant nécessaires au développement des vaccins contre l’hépatite C.

Il a été établi que les glycoprotéines El et E2 possèdent une immunogénicité élevée. Ainsi, l'immunisation de chimpanzés avec des protéines d'enveloppe recombinantes a donné des anticorps spécifiques dirigés contre ces protéines avec un titre de 1/819200 [15]. Cependant, avec l'évolution naturelle de l'hépatite C aiguë et chronique chez l'homme, la réponse humorale aux glycoprotéines virales E1 et E2 est beaucoup plus faible.

Les données publiées sur l'identification des épitopes B linéaires dans les protéines El et E2 sont présentées dans le tableau. 1. Pour l'analyse de ces épitopes, on a utilisé un balayage peptidique, une présentation par un phage et des anticorps monoclonaux. Le procédé de balayage peptidique est basé sur l'utilisation de peptides synthétiques couvrant toute la séquence d'acides aminés de la protéine et déterminant leur immunoréactivité, c'est-à-dire. la capacité d'interagir avec les anticorps de patients atteints d'hépatite C. Cette étude sur les protéines d'enveloppe du VHC a été réalisée pour la première fois par Chiron Corporation (USA) [151]. Plus tard, en 1997, les résultats du balayage peptidique des glycoprotéines El et E2 ont été publiés, dans lesquels

des sérums uniques de femmes infectées il y a 17 ans avec un seul isolat de VHC contaminant le médicament anti-immunoglobuline anti-D ont été utilisés [152].

Grâce aux efforts de trois équipes de recherche dirigées par J. Dubuisson, M. Flint et A.H. Patel, une banque d'anticorps monoclonaux murins et humains (MCA) contre le VHC, a été créée. Elle a permis d'identifier certains épitopes B linéaires et conformationnels des protéines d'enveloppe E1 et E2 [79, 109, 153-155].

Sur la fig. 8 montre la disposition des epitopes B dans la glycoprotéine E2, identifiée par ICA.

Les épitopes B, qui se lient à des anticorps, entraînent la neutralisation du virus. Un tel epitope neutralisant a été détecté dans le premier REH de la protéine E2 [156].

Un autre épitope qui neutralise la liaison d'un virus à une cellule (appelé épitope NOB de la neutralisation de la liaison) a

Fig. 8. Emplacement des epitopes B identifiés à l'aide de l'ACI dans la protéine E2.

Le schéma est donné avec de légères modifications dans les publications de R.F. Clayton et al. [79] et A.M. Owsianka et al. [155].

En haut, des rectangles indiquent les ICA qui reconnaissent l'ectodomaine de la protéine E2, la protéine E2 de taille normale en combinaison avec les protéines E1 et E2 du VPH. La partie inférieure montre l’ACI interagissant avec l’ectodomaine de la protéine E2 ou avec la protéine E2 pleine grandeur en combinaison avec la protéine E1. En noir, on isole les ICA qui inhibent la liaison de l'ectodomaine E2 CD81, la protéine E2 de longueur totale, en combinaison avec E1 et HPV. ICA inhibant la liaison du VPH au CD81 est marqué en gris.

structure conformationnelle dans la formation de laquelle, selon l'hypothèse d'un groupe d'auteurs, participent les résidus d'acides aminés de la séquence 406–644 de la protéine E2 [76, 156, 157] et, selon un autre, les résidus des séquences 414–443 et 490-519 [158 ].

Il est montré qu'un autre épitope B conformationnel plus complexe, qui ne possède pas de propriétés neutralisantes, peut être formé par des résidus d'acides aminés provenant de 3 sites:

297–306 de la protéine E1, 480–494 et 613–621 de la protéine E2 [167].

Dans les glycoprotéines E1 et E2, des épitopes T-helper (CD4 +) et T-killer (CD8 +) ont été identifiés (Tableau 2).

Des études sur la localisation et la structure des épitopes B et T des protéines d'enveloppe du VHC sont en cours. Des informations sur ce sujet sont disponibles sur le site Web du laboratoire national de Los Alamos (États-Unis): http://hcv.lanl.gov.

* Si des peptides à 20 membres ont été utilisés pour déterminer l'épitope, il n'y a pas de localisation précise.

2.2. Antigène nucléocapside Le schéma de la localisation de la protéine nucléocapside (synonymes: noyau, noyau) dans une polyprotéine est illustré à la fig. 1. Cette protéine est impliquée dans les étapes importantes de la morphogenèse du virus: elle forme la nucléocapside virale, initie le conditionnement de l'ARN du VHC et l'assemblage de l'enveloppe du virus [74, 178, 179].

La protéine centrale a probablement d'autres fonctions biologiques. Ainsi, dans diverses expériences sur modèles, il a été montré qu'il interagissait avec les protéines régulatrices et certains éléments structurels de la cellule: avec la protéine p53 [179], premier récepteur du facteur de nécrose tumorale [180], récepteur de la lymphotoxine bêta [181], du facteur de transcription LZIP [182]. ], Protéine STAT3 (qui améliore le signal de transcription) [183], ribonucléoprotéine nucléaire nucléaire hétérogène K [184], hélicase DDX3 [185], vésicules cytoplasmiques triglycérides [186], mitochondries [187], cytokératines cellulaires [188]. Corbeloc serait impliqué dans le développement de la stéatose et de l'hépatocarcinogenèse chez les patients atteints d'hépatite C chronique [179, 186].

La protéine nucléocapside est formée en premier lieu parmi toutes les protéines virales dans le processus de biosynthèse; elle est séparée de la polyprotéine à l'aide de peptidases signal cellulaires [190]. Dans l'hydrolyse protéolytique finale de la protéine centrale, le peptide signal-peptidase SPP récemment découvert participe, réalisant un clivage intramembranaire inhabituel [189, 190].

Le traitement de la protéine nucléocapside s'accompagne du passage de sa forme p23 (193 ako) à p21 (173 aco) et de la phosphorylation des résidus sérine sur les groupes OH [189]. La zone clivée (174-193 aco) porte le signal de translocation, ce qui permet à la partie NH2-terminale de la protéine E1 de tomber dans les réservoirs de RPE [191].

La forme mature de la protéine centrale a une structure amphipathique bien définie: une région hydrophile NH2-terminale et une région hydrophobe COOH-terminale [192]. En conséquence, le domaine D1 (hydrophile) et le domaine D2 (hydrophobe) sont isolés dans la protéine. Une structure similaire est caractéristique des protéines de la nucléocapside de la famille des Flaviviridae. Parfois, un troisième domaine (central), qui présente une teneur inhabituellement élevée en résidus de tryptophane, est également isolé dans la protéine centrale [46].

Le domaine hydrophile D1 contient le site de liaison à l'ARN, les principaux épitopes B conservatifs et le fragment responsable de la formation du dimère de la protéine noyau [192]. La forme fonctionnellement active de la protéine de nucléocapside est formée de deux chaînes polypeptidiques, à savoir. La protéine centrale est un dimère dominé par l'organisation structurelle des hélices alpha. Dans le domaine hydrophobe D2, qui fournit une association avec les membranes et les inclusions lipidiques du cytoplasme, on trouve des hélices alpha amphipathiques avec des surfaces hydrophiles et hydrophobes prononcées.

Parmi toutes les protéines virales, la protéine noyau est caractérisée par la plus forte teneur en zones conservatrices de la structure primaire [193].

La structure des principales régions importantes sur le plan fonctionnel de la protéine de la nucléocapside est illustrée à la Fig. 9. Outre ces zones importantes, il convient de noter la région protéique centrale contenant les résidus d’acides aminés 72–91, qui interagit avec la protéine d’enveloppe E1 [194], la région contenant les résidus 69–104, nécessaire pour préserver l’infectivité du VHC [195], la zone résiduelle 65. –72, qui est susceptible d'être en contact avec le peptide p7 aux premiers stades de la morphogenèse du virus [195].

Selon les données de microscopie électronique, la protéine centrale est localisée dans la cellule sur les membranes EPR, sur les vésicules lipidiques dans le cytoplasme, ainsi que dans le noyau. Le transfert de la protéine noyau dans le noyau de la cellule est réalisé par la protéine de transport cellulaire biparnine NLS, qui interagit avec une séquence signal spéciale dans la protéine noyau [196].

L’étude de la nucléocapside native du sérum et de leurs analogues, obtenue à l’aide de réplicons du VHC, a montré que quelle que soit leur origine, leur coefficient de sédimentation était d’environ 100 S, leur densité flottante en gradient

Fig. 9. La disposition des principaux sites importants du point de vue fonctionnel dans la protéine de la nucléocapside est présentée avec de légères modifications par rapport au C.L. Murray et al. [195].

Au bas des chiffres sont indiqués des numéros de résidus d’acides aminés.

le césium représente 1,28 g / ml et un diamètre de 33–46 nm, déterminé à l'aide d'un microscope à transmission [197, 198]. Selon l'analyse au microscope électronique d'échantillons de biopsie du foie de personnes atteintes d'hépatite C chronique, il a été établi que la taille de la nucléocapside du virus varie de manière plus intensive dans ce cas: de 28 à 48 nm [198].

La protéine noyau est l’un des antigènes les plus immunogènes du VHC. Les données sur ses épitopes B et T sont présentées dans le tableau. 3 et 4.

Il convient de noter que les epitopes B de la protéine de nucléocapside sont concentrés principalement dans le domaine hydrophile et les régions conservées.

2.3. Caractérisation de la protéine NS2 La protéine NS2 est une protéine non structurelle du VHC. Elle se situe dans la polyprotéine après le peptide p7 (voir la figure 1). La protéine NS2 a un poids moléculaire d'environ 23 kDa, ne contient pas de résidus d'hydrate de carbone et est associée aux membranes EPR [206, 207]. La topographie exacte de la protéine dans la membrane n’a pas été établie, il est supposé qu’elle forme 3 brins transmembranaires (voir Fig. 5) [90]. La protéine NS2 est peu soluble, il est donc difficile à étudier.

La fonction biologique principale de la protéine NS2 est l'élimination de la sérine protéase du VHC. Pour son exécution, la protéine NS2 forme un complexe avec un site polyprotéique correspondant à la protéine NS3 [206, 208].

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"Agence fédérale médicale et biologique" INSTITUTION FÉDÉRALE BUDGÉTAIRE DE LA SANTÉ DES ÉTATS. "

“MINISTÈRE DE L’ÉDUCATION ET DES SCIENCES DE LA FÉDÉRATION DE RUSSIE Établissement d’enseignement supérieur professionnel de l’État fédéral UNIVERSITÉ DE L’ÉTAT DE TYUMEN Institut de biologie Département de botanique, biotechnologie et architecture de paysage S.P. Arefyev TAXATION Complexe pédagogique et méthodique. Programme de travail pour les étudiants de la direction 35.03.10 Architecture de paysage de l’enseignement à plein temps de profil Culture de plantes décoratives et pépinières Université d’État de Tyumen. "

“Université d'État d'Extrême-Orient V.V. Isaeva SYNERGETICS FOR BIOLOGISTS Introduction au cours Guide d’étude à Vladivostok Le guide d’étude est basé sur un cours magistral à l’intention des étudiants du département de biologie cellulaire de la Far Eastern State University, lu par l’auteur pendant plusieurs années. Il s'agit d'une description simplifiée et illustrée des idées de base de la science non linéaire (souvent appelée synergie), y compris les théories sur les bifurcations et. "

“INSTITUTION D'ÉDUCATION BUDGÉTAIRE MUNICIPALE“ ÉCOLE SECONDAIRE №18 ”Considéré lors de la réunion“ Convenu ”“ approuvé ”Directeur adjoint du ShMO Sciences naturelles Directeur MBOU“ École secondaire n ° 18 ”Leader T.I. Antonovich sur UVR LA Ishutin V.N. Nikitina Protocole n ° 1 du 23 mai 2014. PROGRAMME D'ÉDUCATION BIOLOGIE 5 9 CATÉGORIE (FEM) Abakan Note explicative Ce programme de biologie est basé sur la norme éducative de l'État fédéral. "