Comment effectuer l'analyse par PCR: description de la procédure

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La réaction en chaîne de la polymérase est connue depuis 30 ans. Il est largement utilisé dans de nombreux domaines, de l'archéologie à la génétique.

C'est la méthode PCR qui permet d'établir la paternité, mais le plus souvent, elle est utilisée pour identifier diverses maladies infectieuses dans le corps humain.

Comment l'analyse PCR est-elle effectuée et en quoi consiste-t-elle? Nous allons essayer de répondre à ces questions en détail.

Analyse PCR - qu'est-ce que c'est?

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est une méthode de diagnostic génétique moléculaire de haute précision qui permet de détecter diverses maladies infectieuses et héréditaires chez l'homme, tant au stade aigu que chronique, et bien avant que la maladie ne se manifeste.

La méthode de PCR est absolument spécifique et correctement effectuée ne peut pas donner un résultat faussement positif. Autrement dit, s’il n’ya pas d’infection, l’analyse ne montrera jamais ce qu’elle est. Par conséquent, il est maintenant très souvent nécessaire d’approuver le diagnostic, une analyse PCR supplémentaire est effectuée pour déterminer l’agent causal et sa nature.

Réaction en chaîne de la polymérase (PCR) en 1983, mise au point par Carey Mulllis (États-Unis), pour laquelle il a reçu en 1993 le prix Nobel de chimie.

Quel est l'avantage de cette méthode?

Le diagnostic par cette méthode permet de trouver l'agent pathogène directement dans le gène contenu dans les matériaux étudiés. C’est l’analyse la plus précise des infections génitales, des infections cachées et de diverses maladies sexuellement transmissibles.

Les différences entre le diagnostic par PCR et les autres méthodes de recherche en laboratoire sont les suivantes:

  • la méthode vise à identifier l'agent pathogène lui-même;
  • Le diagnostic PCR se distingue par sa polyvalence: pour la détection de plusieurs agents pathogènes;
  • maladies, un seul échantillon biologique du patient suffit;
  • la méthode est très sensible et ne s'accompagne pas d'autres réactions croisées.

En outre, l’avantage des diagnostics PCR réside dans le fait que tout le matériel biologique du patient est apte à l’analyse: sang, écoulement des organes génitaux, urine, sperme.

Quelles infections peuvent détecter le frottis sur la PCR?

Un grand nombre d'agents pathogènes peuvent être présents dans le corps, y compris ceux «cachés» qui ne se manifestent pas avant longtemps.

L'analyse du frottis sur la PCR permet de révéler de telles infections:

Le matériel de test pour la PCR est généralement constitué de crachats, de salive, d'urine et de sang. Avant l'analyse, vous devez vous préparer soigneusement, après avoir consulté un médecin.

Le sang pour la PCR est généralement administré à jeun. De bons résultats montrent une analyse lorsque le matériel de l'étude est extrait du canal cervical ou de l'urètre. Dans ce cas, il est préférable de réaliser le diagnostic de la PCR au plus tard un jour après le rapport sexuel.

Variétés de PCR

La PCR est utilisée dans de nombreux domaines pour l'analyse et les expériences scientifiques. Il existe différentes méthodes d'analyse:

  1. La PCR par transcription inverse (PCR par transcription inverse, RT-PCR (anglais)) est utilisée pour amplifier, isoler ou identifier une séquence connue à partir d'une banque d'ARN.
  2. PCR inversée (Inverse PCR (Eng.)) - est utilisée si seule une petite partie est connue dans la séquence souhaitée. Cette méthode est particulièrement utile lorsqu'il est nécessaire de déterminer les séquences adjacentes après l'insertion de l'ADN dans le génome.
  3. La PCR nichée (PCR nichée) est utilisée pour réduire le nombre de sous-produits de la réaction. Deux paires d'amorces sont utilisées et deux réactions consécutives sont effectuées.
  4. La PCR asymétrique (PCR asymétrique) est réalisée lorsqu'il est nécessaire d'amplifier principalement l'une des chaînes de l'ADN d'origine. Utilisé dans certains tests de séquençage et d’hybridation.
  5. PCR quantitative (PCR quantitative, Q-PCR (Eng.)) Ou la PCR en temps réel est utilisée pour observer directement la mesure de la quantité d'un produit de PCR spécifique dans chaque cycle de réaction.
  6. Etape PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - l’utilisation de cette approche réduit l’effet de la liaison non spécifique des amorces.
  7. PCR spécifique à un groupe (PCR spécifique à un groupe) - PCR pour des séquences apparentées au sein d'une espèce ou entre différentes espèces, en utilisant des amorces conservatrices pour ces séquences.

Si la séquence nucléotidique d'une matrice est partiellement ou inconnue, il est possible d'utiliser des amorces dégénérées, dont la séquence contient des positions dégénérées dans lesquelles toutes les bases peuvent être localisées. Par exemple, la séquence d'amorce peut être:... ATH..., où H est A, T ou C.

Quels matériaux biologiques sont à l'étude?

Le matériel utilisé pour les études PCR, dans lequel l’ADN bactérien étranger peut être identifié, ou l’ADN ou l’ARN du virus, peut être constitué de divers milieux biologiques et fluides humains:

  1. Urine Il peut être utilisé pour l'infection du tractus urogénital chez l'homme et des organes urinaires chez la femme (chez l'homme, l'utilisation de l'urine comme matériau remplace le grattage épithélial).
  2. Flegme. Il est utilisé pour diagnostiquer la tuberculose et moins fréquemment pour diagnostiquer les formes respiratoires de chlamydia et de mycoplasmose. Des crachats d'une quantité de 15 à 20 ml sont recueillis dans une bouteille stérile (à usage unique).
  3. Fluides biologiques. Le jus de prostate, la plèvre, le céphalo-rachidien, l'amniotique, le liquide articulaire, le lavage broncho-alvéolaire, la salive sont collectés selon les indications.
  4. Grattements épithéliaux des muqueuses. Communément utilisé pour le diagnostic des maladies sexuellement transmissibles (MST), telles que la gonorrhée, la chlamydia, la mycoplasmose, l'ureaplasmose, la trichomonase, la gardnerellezis, les infections herpétiques et autres affectant les muqueuses.
  5. Biopsies. Les biopsies de l'estomac et du duodénum les plus couramment utilisées pour identifier l'infection à Helicobacter pylori.
  6. Sang, plasma, sérum. Utilisé pour l'analyse PCR des virus de l'hépatite B, C, D, G, de l'herpès, du CMV, du VIH et des gènes humains.

Comment se préparer à l'analyse?

La fiabilité du résultat de la PCR dépend directement de l'exactitude de la livraison du matériel à examiner. Le matériau ne doit pas être contaminé, sinon le résultat de l'étude ne sera pas objectif. Les recommandations les plus importantes avant de soumettre une analyse de PCR sont les suivantes:

  1. L'urine est livrée le matin dans un récipient stérile.
  2. Un test sanguin d'infection doit être pris à jeun le matin.
  3. Il n'est pas nécessaire de montrer l'activité sexuelle la veille de l'analyse.

Le résultat de l'analyse sera prêt 1,5-2-2 jours après la procédure. Il y a des situations où le résultat peut être préparé le même jour.

Décodage de l'analyse du CRP

Le processus d'interprétation de la recherche présentée se distingue par sa simplicité. Les résultats de l'analyse PCR peuvent être obtenus 1,5-2x jours après la livraison du matériel. Dans certains cas, le résultat est prêt dès le premier jour et voici ce que cela peut signifier:

  • Un résultat négatif indique que l'agent infectieux est absent du matériel diagnostiqué.
  • Pcr positif signifie que l'ADN ou l'ARN du pathogène est présent dans le corps humain.

Dans certains cas, effectuez une détermination quantitative des microorganismes. Cela est particulièrement vrai pour les maladies causées par des microorganismes pathogènes sous condition. Depuis ces bactéries montrent leur impact négatif uniquement avec des quantités excessives.

En outre, l'analyse quantitative de la PCR est importante pour le choix des tactiques thérapeutiques et pour contrôler le traitement des infections virales telles que le VIH et les virus de l'hépatite.

Quelle est la précision du diagnostic des infections par PCR?

La méthode PCR se distingue par une précision, une spécificité et une sensibilité élevées. Cela signifie que cette analyse est capable de:

  • déterminer avec précision la présence ou l'absence d'infection;
  • spécifier exactement quel type d'infection (spécificité);
  • détecter les infections même avec une très faible teneur en ADN en microbes contenus dans du matériel biologique,
  • qui a fait l'objet de recherches (sensibilité).

Analyse PCR: prix et délai

Le prix d'une analyse spécifique dépend de l'infection pour laquelle vous êtes vérifié. Prix ​​et conditions approximatifs:

  1. STI: 300-500 roubles, le temps - 1 jour;
  2. Virus Epstein-Barr, papillomavirus humain, herpès, cytomégalovirus: 300 à 500 roubles, temps - 1 jour;
  3. Hépatite A, B, C, D, G: analyse qualitative de 650 roubles, analyse quantitative de 2000 roubles. Conditions - jusqu'à 5 jours;
  4. Anticorps contre le virus de l'hépatite C, total (anti-VHC) - 420 roubles;
  5. Anticorps contre le virus de l'hépatite C, IgM (IgM anti-HCV) - 420 roubles;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300 à 400 roubles, termes - 1 jour;
  7. VIH (anticorps et antigènes) - 380 roubles;
  8. ARN du VIH, qualitativement - 3 500 roubles;
  9. ARN du VIH, quantitativement - 11 000 roubles.

Pour économiser de l’argent, vous pouvez choisir un lot d’analyses déterminé. Ce service est fourni par la majorité des cliniques où il est possible de passer l’analyse par la méthode ERP (invitro, onclinics, etc.)

Qu'est-ce que le diagnostic PCR? Quelles maladies détermine?

Les méthodes modernes de recherche en laboratoire de haute technologie vous permettent d'identifier la maladie à un stade précoce. Les maladies infectieuses se développent et évoluent, elles deviennent de plus en plus difficiles à identifier. Le diagnostic par PCR (réaction en chaîne de la polymérase) est l’un des plus récents et des plus précis. La scientifique Carey Mullis a reçu le prix Nobel pour son développement.

La réaction en chaîne de la polymérase est une méthode de diagnostic génétique moléculaire qui permet de détecter différents types de pathologies infectieuses et héréditaires, tant sous forme aiguë que chronique, et bien avant que la pathologie ne commence à se manifester. La plupart des médecins rencontrent cette analyse tous les jours et n'imaginent plus comment il est possible de poser le diagnostic correct et le stade de la maladie sans celle-ci.

Le diagnostic par PCR (réaction en chaîne de la polymérase) est l’un des plus récents et des plus précis

L'essence du diagnostic PCR

Dans l'analyse de la PCR en utilisant les principes de la biologie moléculaire. Au cours de sa mise en œuvre, des enzymes spéciales sont utilisées qui répliquent de manière répétée des fragments d’ARN et d’ADN, ainsi que des micro-organismes qui excitent les maladies et qui se trouvent dans du matériel biologique humain. La copie se faisant en plusieurs étapes, une réaction en chaîne se forme. Après cela, les spécialistes de laboratoire réconcilient les données obtenues avec la base générale et identifient les agents responsables de la maladie, ainsi que leur concentration. Les diagnostics sont effectués dans un appareil spécial qui produit le refroidissement et le chauffage du tube avec le biomatériau et est appelé amplificateur. Le respect du régime de température affecte la véracité des résultats d'analyse.

Des fragments d'ADN de micro-organismes peuvent être contenus dans les matériaux biologiques suivants:

  • fluides biologiques;
  • sang et ses dérivés;
  • raclage de cellules épithéliales ou d'un frottis;
  • l'urine;
  • crachats;
  • mucus et autres sécrétions biologiques;
  • biopathes de la membrane muqueuse du tractus gastro-intestinal.

Où le diagnostic PCR est-il appliqué?

Les possibilités de diagnostic des maladies infectieuses avec l’utilisation de la réaction en chaîne de la polymérase sont nombreuses. C’est pourquoi il est possible d’identifier une variété de virus qui causent des infections telles que:

  • Le diagnostic VIH-PCR du VIH est très efficace pour détecter le virus qui cause cette maladie, bloque les fonctions de protection et ouvre la voie au corps humain pour diverses pathologies;
  • herpès - le diagnostic de l'herpès par PCR peut détecter un virus chez une personne seulement pendant la rechute, cette méthode vous permet de déterminer de quel type il s'agit;
  • infections urinaires - le diagnostic PCR des infections urogénitales (chlamydia, ureaplasmose, gardnerellez, mycoplasmose, trichomonase, candidose, etc.) est activement utilisé aujourd'hui, car il est difficile d'identifier les agents responsables des IST à l'aide de tests traditionnels, et le diagnostic d'infections par PCR permet d'identifier la présence de microorganismes pathogènes et le temps nécessaire pour commencer le traitement;
  • hépatite - le diagnostic de l'hépatite par PCR est l'une des étapes les plus importantes pour déterminer les causes de son apparition et pour définir un schéma thérapeutique adéquat; il est impossible de poser un diagnostic adéquat de cette pathologie sans utiliser les méthodes de biologie moléculaire modernes;
Les possibilités de diagnostic des maladies infectieuses avec l’utilisation de la réaction en chaîne de la polymérase sont grandes, il peut être utilisé pour identifier une variété de virus qui causent diverses infections.
  • listériose - le diagnostic PCR permet de détecter même un seul agent pathogène de cette maladie dans les plus brefs délais;
  • cytomégalovirus - le diagnostic PCR de cette maladie est considéré comme progressif, mais il ne permet pas de déterminer si l’infection est primaire ou répétée, c’est-à-dire qu’il ne fait pas la distinction entre le virus actif et le dormeur;
  • tuberculose - Le diagnostic PCR de la tuberculose permet de détecter la présence d’une forme active de la pathologie plusieurs fois plus rapidement que d’autres études. Cette analyse permet de surveiller épidémiologiquement les sécrétions bactériennes dans le contexte d’une stabilisation apparente de l’état du patient. Pour diagnostiquer la tuberculose chez l'enfant, un test de Mantoux est réalisé; s'il est positif, la méthode PCR permet de confirmer avec une grande précision le diagnostic établi et de déterminer non seulement la tuberculose pulmonaire, mais également la défaite de la peau, des reins, des intestins et d'autres organes par ce virus;
  • papillomavirus humain - le diagnostic PCR du HPV est utilisé pour déterminer son type et contribuer à déterminer les caractéristiques quantitatives et qualitatives du virus;
  • encéphalite à tiques - les résultats de la PCR permettant de déterminer la forme chronique de la maladie sont les plus fiables;
  • infestation par des vers - le diagnostic de parasites aide à identifier les invasions de protozoaires et de parasites intracellulaires, mais ne permet pas de déterminer la gravité de l'infection ni le nombre de parasites dans le corps;
  • Infection à Helicobacter pylori - En utilisant la méthode PCR, il est possible d'identifier les poinçons Helicobacter pylori hautement pathogènes et faiblement pathogènes, ce qui est important pour le pronostic de la maladie et un traitement efficace.

Ce n'est pas une liste complète des maladies détectées par analyse PCR. La plupart de ces pathologies au stade précoce sont presque imperceptibles, mais les conséquences de leurs effets sur le corps sont extrêmement négatives et souvent dangereuses pour la santé et la vie humaines.

Un test PCR est prescrit aux femmes enceintes pour identifier les infections sexuellement transmissibles qui augmentent considérablement le risque de cancer du col utérin, ce qui nuit au déroulement de la grossesse et à la santé de l'enfant. Par conséquent, le diagnostic des MST est extrêmement important pour prévenir l’infection du fœtus par des microorganismes pathogènes.

Sur la base de tout ce qui précède, nous pouvons conclure que le diagnostic de laboratoire utilisant la méthode PCR aide le médecin à établir un diagnostic précis et à prescrire un traitement efficace dans chaque cas individuel.

C'est intéressant! Outre la médecine, la méthode PCR est également utilisée dans d'autres domaines, par exemple en criminalistique, lorsqu'il est nécessaire d'identifier le biomatériau trouvé sur le lieu du crime et que parfois, la PCR est utilisée pour déterminer la paternité, pour mener des expériences de mutation d'ADN et d'autres expériences.

Avantages et inconvénients de la méthode

Les avantages du diagnostic PCR sont les suivants:

  • la haute sensibilité du test permet d'identifier même des agents uniques du pathogène, ce qui permet d'identifier la pathologie à un stade précoce, sous forme chronique et latente;
  • l'universalité de la méthode permet d'utiliser presque tous les biomatériaux pour la recherche, de la salive aux cellules de la peau;
  • large couverture - en examinant un échantillon, il est possible de déterminer la présence de plusieurs agents pathogènes différents;
  • Précision - le niveau élevé de cette méthode d’enquête vous permet d’éviter de donner de faux indicateurs;
  • rapidité - le résultat est prêt en moyenne pendant cinq heures, c’est-à-dire que le patient le lendemain de la soumission du biomatériau peut déjà en tirer la conclusion;
  • prix relativement bas - le coût de cette méthode de diagnostic ne diffère pas de celui des autres tests sanguins en laboratoire;
  • En utilisant cette méthode, vous pouvez effectuer des diagnostics précliniques et rétrospectifs. Le premier identifie les microorganismes pathogènes avant l'apparition de la maladie et le second après la pathologie transférée, ce qui vous permet d'empêcher la pathologie de se développer et de la guérir dans le temps, ainsi que de déterminer la forme latente de la maladie qui se manifeste sans symptômes évidents.

Mais il n’existe pas de méthode de diagnostic parfaite, la PCR présente donc également des inconvénients:

  • exigences élevées de conformité avec le processus;
  • exigences élevées sur le professionnalisme des assistants de laboratoire.

Astuce! Il est préférable de réaliser une telle analyse uniquement dans les laboratoires les meilleurs et les plus professionnels, où des systèmes de contrôle de qualité stricts sont mis en œuvre.

La polyvalence de la méthode du centre de diagnostic permet d’utiliser presque tous les biomatériaux pour la recherche, de la salive aux cellules de la peau.

Recommandations pour préparer l'analyse

Pour la fiabilité des résultats, vous devez suivre les règles de préparation préliminaire à l'analyse:

  • lorsque vous donnez de la salive, vous ne devez ni manger ni boire de médicaments quatre heures avant l'analyse, vous devez vous rincer la bouche à l'eau bouillie avant l'intervention, puis un petit massage de la peau doit être effectué afin que le secret de la glande soit sécrété;
  • l'urine est généralement collectée à la maison. Avant de laver les parties génitales et de recueillir dans un récipient spécial 50 ml de la première urine matinale, il est peu pratique de recueillir du matériel pendant la menstruation;
  • avant de se rendre sperme, les hommes n'ont pas besoin de faire l'amour pendant trois jours, de ne pas aller au sauna, de ne pas se baigner dans un bain chaud, de ne pas prendre de boissons alcoolisées ni de nourriture épicée. Immédiatement avant l'analyse, il est interdit d'uriner pendant trois heures.
  • pour la livraison de frottis urogénital recommandé l'absence de sexe pendant trois jours. Deux semaines avant l'analyse, les médicaments antibactériens sont interdits. Pendant une semaine, il est nécessaire d'arrêter d'utiliser des gels intimes, des pommades, des suppositoires vaginaux, de ne pas faire de douches vaginales. Trois heures avant de prendre le biomatériau, vous devez vous abstenir d'aller aux toilettes.
  • le sang est donné le matin à jeun.

Le matériel de diagnostic doit être collecté dans des conditions qui excluent sa contamination, car cela peut affecter de manière significative la véracité du résultat de la PCR.

Analyse de décodage

L'analyse peut montrer un résultat positif ou négatif. Négatif signifie que les infections présumées dans le corps sont absentes et que la personne est en bonne santé. Positif dit que le patient est malade et a besoin d'un traitement. Tous les indicateurs doivent déchiffrer et exprimer le médecin. Vous ne devez pas vous fâcher et avoir peur des mauvais résultats. Sur la base de ces médicaments, une thérapie est prescrite. Le principal est de ne pas retarder le processus et de ne pas prendre de médicaments.

Analyse PCR: qu'est-ce que c'est?

Le diagnostic PCR (réaction en chaîne de la polymérase) est l’une des méthodes d’examen les plus modernes dans le domaine de la biologie moléculaire et présente certains avantages par rapport à d’autres méthodes.

Nous comprendrons plus en détail l'analyse PCR - qu'est-ce que c'est?

Parmi toutes les études de laboratoire, la méthode PCR est considérée comme l’une des plus précises pour diagnostiquer diverses maladies causées par des virus ou des agents bactériens. De plus, les diagnostics PCR deviennent chaque jour plus accessibles et un niveau de spécificité accru assure des résultats précis et corrects, éliminant ainsi les fausses réponses.

La réaction en chaîne de la polymérase est capable d’amplifier, en termes simples, d’augmenter plusieurs fois la quantité requise de l’ADN de l’agent pathogène dans le matériel à l’étude.

En plus d’amplifier l’ADN de l’agent pathogène, cette méthode de diagnostic est utilisée pour déterminer la paternité, les gènes de clones, pour identifier les maladies héréditaires et d’autres choses.

La réaction en chaîne de la polymérase est capable d’amplifier, en termes simples, d’augmenter plusieurs fois la quantité requise de l’ADN de l’agent pathogène dans le matériel à l’étude.

Quelles maladies peuvent être diagnostiquées à l'aide de la PCR?

Alors qu'est-ce que c'est: l'analyse PCR, et pourquoi utiliser cette méthode? Le spécialiste peut ordonner la PCR pour détecter diverses infections dans le corps d'origine bactérienne ou virale. En outre, en utilisant la PCR, il est possible de détecter des infections avec une évolution chronique ou cachée. L'analyse PCR est efficace même s'il y a des cellules mono- pathogènes dans le corps.

Dans le cas de la désignation de PCR pour la détection d’infections génitales, l’objet peut être une chlamydia, une trichomonas, un candida, un mycoplasme, un ureaplasma, l’agent responsable du virus du papillome et de la gonorrhée, gardnerella.

Pour déterminer l'agent responsable de la défaite du tractus génital, le matériel est prélevé pour analyse PCR à l'aide d'un frottis vaginal, urétral ou du canal cervical.

Pour déterminer l'agent responsable de la défaite du tractus génital, le matériel est prélevé pour analyse PCR à l'aide d'un frottis vaginal, urétral ou du canal cervical.

Avant de planifier une grossesse ou lorsqu’elle se produit, les futurs parents devraient subir un test de diagnostic PCR pour détecter la présence de maladies infectieuses. Après tout, la planification de la grossesse est une période très importante de la vie de la future mère et du futur bébé. Vous devez donc prendre la conception de manière responsable. Si, néanmoins, dans le corps d'une femme et d'un homme, des agents infectieux ont été identifiés, il est préférable de reporter la planification de la grossesse pour la durée du traitement.

Outre les infections des voies génitales, d'autres agents pathogènes peuvent être détectés par PCR, tels que:

  • La présence des virus B et C dans le corps: une analyse PCR aidera à déterminer le type de virus qui est l'agent causal de l'hépatite avant les manifestations cliniques de la maladie; La méthode PCR aidera le spécialiste à choisir le traitement approprié pour la maladie et à surveiller son efficacité;
  • La présence d'agents pathogènes de la tuberculose: cette méthode d'examen peut révéler les formes de tuberculose que d'autres tests de laboratoire ne peuvent pas déterminer; La PCR est prescrite si une personne présente les symptômes appropriés, par exemple une augmentation de la température corporelle, des processus inflammatoires débutant dans les voies respiratoires, une réaction positive est notée au cours d'un test tuberculinique;
  • Virus de l'immunodéficience humaine;
  • Le virus d'Epstein-Barr et le cytomégalovirus;
  • Helicobacter pylori.

La PCR peut détecter les virus B et C dans le corps.

Comment la PCR est-elle analysée?

Pour comprendre ce que c'est - l'analyse PCR, vous devez savoir comment cette étude est menée.

Après avoir pris le matériel à des fins de recherche, il est transféré dans un appareil spécial, où sont placées des enzymes spéciales qui contribuent à la formation du matériel génétique. Après cela, la copie de l'ADN et de l'ARN du virus commence jusqu'à ce qu'elle atteigne la quantité à laquelle il sera possible d'identifier l'agent causal de la maladie.

Le matériel de l'étude est principalement du sang, mais il utilise également de l'urine, un écouvillon pharyngé et d'autres matériaux.

Chez les femmes, le plus souvent, reproduisent le matériel du canal cervical et de l'urètre. Dans ce cas, pour obtenir le bon résultat, il est très important de préparer la procédure. La préparation comprend les éléments suivants:

  • 3 jours avant l'analyse PCR, une femme devrait s'abstenir de tout contact sexuel;
  • Ne pas uriner avant d'effectuer la procédure;
  • Après la fin de la menstruation, 4-5 jours devraient s'écouler avant l'examen.

Il convient de noter qu'une préparation spéciale n'est pas nécessaire pour la prise de sang.

Le matériel de l'étude est principalement du sang, mais il utilise également de l'urine, un écouvillon pharyngé et d'autres matériaux.

Réponses PCR

Le décryptage des réponses est généralement prêt le lendemain. Il n'y a que deux résultats: positif (s'il y a une infection dans le corps) et négatif (si aucun ADN d'agent pathogène n'a été détecté).

En répondant à la question suivante: analyse PCR, nous pouvons affirmer sans équivoque que l’importance de cette méthode de recherche en laboratoire est difficile à surestimer. Ces diagnostics seront en mesure de contrôler la conduite du traitement prescrit contre les virus et les infections, séparément en cas d’hépatite et de VIH.

Qu'est-ce qu'un test sanguin pour la PCR et pourquoi est-il nécessaire?

Le diagnostic des maladies infectieuses, bactériennes et virales, vise la détection précoce des agents pathogènes, ce qui permet de prescrire un traitement précoce et le plus efficace. La méthode la plus moderne pour diagnostiquer les infections est la PCR ou la réaction en chaîne de la polymérase. Alors, quelle est cette méthode et à quoi sert-elle?

L'essence de la réaction de polymérase

Tous les micro-organismes et virus contiennent des molécules d'ADN ou d'ARN dans leur structure. Dans chacun d’eux, ces composés sont uniques, donc si vous sélectionnez des acides nucléiques dans un test sanguin chez l’enfant ou l’adulte, vous pourrez poser un diagnostic avec une précision absolue.

Malheureusement, la concentration d’ADN dans les échantillons de sang ou d’autres matériels biologiques est assez faible et ne peut être déterminée à l’aide des méthodes de diagnostic classiques. Pour faire face à ce problème, la réaction en chaîne de la polymérase a été inventée.

L’essence de la PCR est un traitement spécial d’un échantillon de sang, qui augmente la concentration en molécules d’ADN, la détermination du type permet en outre de déterminer le type de pathogène et de poser un diagnostic.

Comment donner du sang pour la PCR

Pour vous préparer à l’analyse, suivez les recommandations générales: ne buvez pas ou ne mangez pas immédiatement avant le test sanguin. Bien que vous ne puissiez pas respecter strictement ces exigences en matière de don de sang en PCR, l’exactitude de l’étude ne dépend pas du fait que l’analyse ait été réalisée à jeun ou à l’estomac.

Quelles maladies peuvent être détectées par PCR

La PCR peut détecter presque toutes les maladies virales et bactériennes. Pour l'analyse, on utilise non seulement du sang, mais également du matériel biologique: sperme, salive, frottis de l'urètre et du col de l'utérus. Une analyse de sang sera informative si l'agent causal d'une maladie particulière pénètre dans le sang humain. Par conséquent, la PCR sanguine est prescrite pour les maladies suivantes:

  • hépatite virale A, B, C, D et TT;
  • cytomégalovirus;
  • infection à herpès (virus de l'herpès de types 1, 2 et 4);
  • Infection par le VIH
  • infection à entérovirus;
  • bardeaux;
  • la rubéole
  • la toxoplasmose;
  • mononucléose infectieuse;
  • listériose

Si nous prenons en compte la possibilité de réaliser la PCR d’autres biomatériaux, il convient d’ajouter la liste des maladies détectées par la PCR:

L'analyse par PCR du sang d'une femme enceinte pour les infections dites à TORCH: cytomégalovirus, toxoplasmose, rubéole et virus de l'herpès est particulièrement pertinente. Cela est dû au fait que ces maladies peuvent entraîner un développement anormal du fœtus.

Avantages de la PCR

  1. 100% de précision du diagnostic - s'il y a même plusieurs fragments d'ADN pathogènes dans le sang, ils seront détectés par PCR et un diagnostic précis sera établi. C'est la principale différence entre cette méthode et d'autres méthodes de diagnostic - ELISA, test sanguin général et autres.
  2. Spécificité Lors de la PCR, il n’existe aucun résultat faux positif ou faux négatif. Contrairement à l’immunoanalyse enzymatique (ELISA).
  3. La possibilité d'analyser simultanément plusieurs agents pathogènes à partir d'un seul échantillon de biomatériau, ce qui rend la méthode pratique pour le patient - inutile de passer l'analyse plusieurs fois.
  4. La vitesse. Pas besoin d'isoler et de développer l'agent pathogène sur un milieu nutritif, comme c'est le cas avec un examen bactériologique. Le résultat peut être prêt le jour de l'analyse.
  5. À l'aide de la PCR, les agents pathogènes de maladies latentes sont détectés lorsqu'il y a un agent pathogène dans le corps, mais que celui-ci n'a pas encore provoqué la maladie, ou lorsque le patient est porteur de l'infection (hépatite ou VIH).
  6. Faible coût. Le prix de l'analyse PCR par agent pathogène est compris entre 250 et 500 roubles. Un test viral semi-quantitatif coûte un peu plus cher - environ 1000 roubles.

Manque d'analyse

La PCR est une méthode de recherche de haute technologie et impose des exigences élevées aux équipements de laboratoire. La pièce dans laquelle l'analyse est effectuée doit obligatoirement être équipée d'un filtre d'épuration biologique, car les particules de peau, les molécules de salive contenant de l'ADN sont constamment présentes dans l'air. Ne pas travailler avec des biomatériaux peut entraîner des résultats incorrects.

Test sanguin - transcription chez l'adulte (PCR)

L’interprétation des résultats de cette étude n’est pas difficile, car il n’existe pas de tableau de normes pour l’analyse sanguine en PCR. Seules deux phrases peuvent apparaître dans le formulaire de résultats:

  • résultat négatif - l'agent pathogène pour lequel l'analyse a été effectuée n'a pas été détecté;
  • résultat positif - dans le corps il y a un agent causatif de cette maladie.

Vous devez savoir que la PCR peut être positive même en l'absence de symptômes cliniques de la maladie! Le décodage des tests sanguins pour la PCR chez l'enfant ne diffère pas de celui chez l'adulte.

Qui doit passer l'analyse pour la PCR?

Tout le monde peut donner du sang pour la recherche. L’indication directe de l’étude est la suspicion d’infections sexuellement transmissibles (chlamydia, gardnerellose, infection à VIH). En cas de rapport sexuel accidentel non protégé, seule la PCR aidera à diagnostiquer à un stade précoce si une personne a contracté une maladie. Les femmes enceintes doivent obligatoirement faire un don de sang pour le complexe TORCH. Et aussi les femmes qui ne planifient que leur grossesse.

Bien que la PCR soit la méthode de diagnostic la plus efficace, vous ne devez pas vous arrêter dessus. L'examen du patient pour n'importe quelle maladie devrait être une approche intégrée. Si la réaction en chaîne de la polymérase permet d'identifier l'agent pathogène, l'étude sérologique permet d'évaluer l'efficacité du traitement, la réponse de l'organisme à l'agent pathogène et les médicaments. Prescrire toutes les études devraient médecin en fonction du témoignage.

Pour voir comment le test sanguin PCR est effectué, vous pouvez visionner cette vidéo:

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Diagnostic PCR: sur quoi est-il basé, comment procède-t-il, biomatériau et préparation, pour quelles maladies convient-il?

PCR (réaction en chaîne de la polymérase) - réalisation de la biologie moléculaire, l’une des principales méthodes de diagnostic en laboratoire clinique de la fin du 20e siècle et du début du 21e siècle, procurant de grands avantages dans divers domaines de la science médicale.

Beaucoup de gens le confondent avec ELISA (dosage immuno-enzymatique), ce qui est généralement compréhensible. Ils se ressemblent un peu, dans la mesure où ils accomplissent une tâche: la recherche de la cause des pathologies causées par la pénétration d’agents infectieux dans le corps humain. Cependant, il existe des différences entre eux. L’ELISA, par exemple, recherche des traces de micro-organismes, c’est-à-dire des anticorps (AT), et la PCR détecte le «sacré trésor» de l’agent pathogène - ADN ou ARN (acides nucléiques) qui donne la vie à des êtres microscopiques étrangers au corps humain.

Les méthodes de PCR utilisent les acides nucléiques «ennemis» disponibles dans tous les liquides et tissus biologiques du corps. Cette analyse ne vous oblige donc pas à utiliser uniquement du sang veineux. Vous pouvez également prendre de la salive, des sécrétions génitales, des expectorations ou tout autre support porteur d'informations. Le choix du matériel d'étude reste le choix du médecin qui suggère une pathologie particulière et sait dans quel environnement l'environnement est plus informatif.

Quelle est l'essence de la réaction en chaîne de la polymérase?

La recherche en PCR est un exploit et un grand accomplissement de la biologie moléculaire. C'est une méthode qui, en détectant les microsites d'ADN ou d'ARN de matériel génétique étranger (génome), est capable de reconnaître les caractéristiques individuelles inhérentes à un seul type de micro-organisme, sans le confondre avec un autre. Comment fonctionne la méthode PCR et comment parvient-elle à restituer l'image du comportement d'une cellule infectieuse dans un organisme vivant?

Processus de PCR

Ainsi, un fragment d'acide nucléique a été trouvé, mais il est seul et ne suffit pas pour mener une réaction, il est donc codé (copie). Cependant, pour la suite du processus, un grand nombre de telles microparcelles est nécessaire, ce qui peut assurer sa reproduction en complétant de nouveaux segments d'ADN identiques au fragment trouvé (réplication). La reproduction est une propriété naturelle et inaliénable d'un acide nucléique qui se réplique à l'aide d'une enzyme polymérase même en dehors d'un organisme vivant (dans un tube à essai avec échantillon) en formant de nombreux clones, c'est-à-dire qu'une réaction en chaîne se produira. Tous les nouveaux et nouveaux fragments seront clonés, mais uniquement ceux auxquels le chercheur s'intéresse. C'est pourquoi il est si important de procéder à une analyse «pure», sans aucune impureté, et d'effectuer le test très soigneusement.

Compte tenu de la capacité de la réaction en chaîne de la polymérase indiquée ci-dessus, on peut deviner pourquoi elle distingue si facilement l’ureaplasma des mycoplasmes, ou de chacun d’eux de la chlamydia.

Ainsi, même si parmi les millions de cellules du corps humain, non pas le virus vivant est perdu, mais seulement une partie de son ADN, la PCR, si rien ne l’empêche, fera probablement face à la tâche et signalera la présence de «l’étranger» avec un résultat positif. C'est l'essence même de la PCR et son principal avantage.

Forces et faiblesses

Le laboratoire effectuant le diagnostic PCR a les exigences les plus élevées en termes d'équipements, de systèmes de test et de qualifications du personnel médical. Il s’agit d’un laboratoire de haute technologie disposant d’un arsenal de réactifs très sensibles et très spécifiques, il n’a donc aucun inconvénient particulier. À moins que cela ne donne un résultat positif en l’absence de manifestations cliniques et que le prestataire de soins de santé se trouve donc dans un dilemme: le traitement doit-il commencer ou non?

Le médecin, observant le patient, commence à douter de la fiabilité des résultats du test, car il ne voit aucun signe de la maladie. Néanmoins, étant donné la grande sensibilité du système de PCR, il convient de rappeler qu’il détecte le pathogène même au stade préclinique, et un résultat positif dans ce cas est un avantage plutôt qu'un inconvénient. Sur cette base, le médecin traitant doit décider de la pertinence du traitement, en tenant compte des autres avantages et inconvénients.

Les avantages du diagnostic à l'aide de la réaction en chaîne de la polymérase sont évidents:

  • Haute spécificité, pouvant atteindre 100%, en raison de la présence dans l'échantillon de particules d'acides nucléiques inhérentes à un organisme particulier, mais étrangères à l'homme;
  • Haute performance, car la PCR est une technique automatisée de haute technologie qui permet d'effectuer des tests le jour de la prise du matériel et de se débarrasser du patient de problèmes inutiles.
  • PCR, travaillant sur un seul échantillon, est en mesure de mener plusieurs études et de détecter plusieurs agents pathogènes s’il a une telle tâche à accomplir. Par exemple, dans le diagnostic de l'infection à chlamydia, où la PCR est l'une des méthodes principales, il est possible, avec l'infection à chlamydia, de détecter le neisseria (gonocoque), l'agent responsable de la gonorrhée. De plus, la fiabilité des résultats n’est pas affectée négativement;
  • Les tests par PCR révèlent des microorganismes dangereux en période d’incubation, quand ils n’ont pas eu le temps de causer des dommages importants à l’organisme, c’est-à-dire qu’un diagnostic précoce met en garde sur le développement futur du processus pathologique, ce qui permet de le préparer et de le prendre entièrement armé.

De plus, pour éviter les malentendus, pouvant parfois survenir lors du diagnostic, PCR se protège par le fait que ses résultats peuvent être corrigés (photo, ordinateur) afin de les utiliser à des fins professionnelles, si nécessaire.

Un résultat négatif, indiquant l'absence de fragments d'acides nucléiques étrangers, est considéré comme normal dans les réponses PCR, une réponse positive indique la présence d'une infection dans le corps, les valeurs numériques indiquent l'état du virus et sa concentration au moment des tests. Cependant, le décodage complet de l'analyse est effectué par un médecin ayant fait l'objet d'une étude spécifique sur le sujet de la PCR. Essayer d'interpréter vous-même les résultats n'a aucun sens, car il est possible, comme cela est susceptible de se produire, de mal comprendre et de commencer à s'inquiéter d'avance.

Qu'est-ce que le PCR "craint", qu'est-ce qu'il est capable de faire et comment s'y préparer?

Comme dans toute autre étude, les résultats des tests sont parfois faussement positifs ou faussement négatifs, la PCR ne faisant pas exception à la règle. Cela peut arriver dans les cas suivants:

  1. Violations du processus à un stade de la réaction;
  2. Non-respect des règles pour la collecte de matériel, son stockage ou son transport;
  3. La présence d'impuretés dans le matériau.

Ceci suggère que le diagnostic des infections par PCR doit être abordé avec précaution, avec soin, sinon les échantillons du matériau pourraient changer de structure ou même s’effondrer.

Étapes du diagnostic PCR. De faux résultats peuvent entraîner des irrégularités à n’importe quel stade de l’étude.

Le diagnostic PCR des infections appartient à la catégorie des «normes de référence» parmi d'autres méthodes de laboratoire. Il peut donc être utilisé pour rechercher les agents pathogènes de nombreuses maladies qui, à première vue, n'ont rien en commun:

  • Tuberculose de localisation variée, pneumonie (y compris atypique, causée par la chlamydia);
  • Infections infantiles (rougeole, rubéole, parotite, rougeole);
  • La diphtérie;
  • La salmonellose;
  • Maladie infectieuse zoonotique - listériose (la maladie se caractérise par une variété de symptômes entraînant des lésions des ganglions lymphatiques, du système nerveux central et des organes internes);
  • Maladies causées par la pénétration du virus d'Epstein-Barr (mononucléose infectieuse, etc.);
  • Pathologie oncologique provoquée par une infection à papillomavirus humain (HPV et ses types);
  • Borréliose (maladie de Lyme, encéphalite à tiques);
  • Infection à Helicobacter pylori, causée par le microbe Helicobacter pylori vivant dans l'estomac humain. Il a été prouvé que Helicobacter provoque un cancer de l'estomac ou du duodénum;
  • Candidose et pratiquement toutes les MST.

Le diagnostic PCR des infections sexuellement transmissibles revêt une importance particulière, car les maladies ainsi provoquées durent souvent longtemps, sans aucune manifestation clinique, mais deviennent ensuite plus actives pendant la grossesse et menacent ainsi la santé, voire la vie de l'enfant. Les infections à TORCH se comportent de la même manière. Certaines d'entre elles («coller») s'appliquent simultanément aux IST, de sorte que ces dernières nécessitent un examen plus détaillé. Le lecteur pourra se familiariser avec les techniques les plus populaires dans les sections suivantes de l'article.

Comment bien se préparer pour obtenir un résultat fiable?

Nous constatons immédiatement que la préparation de la PCR est assez simple et ne nécessite aucun effort particulier de la part du patient. Vous devez simplement effectuer trois tâches simples:

  1. Ne pas avoir de rapports sexuels 24 heures avant le test;
  2. Pour la collecte et l'analyse du sang d'une veine, vous devez venir l'estomac vide. En passant, vous ne pouvez pas le boire non plus.
  3. La main sur l'urine devrait nuit (le matin - dans un pot stérile, acheté la veille à la pharmacie).

La PCR peut fonctionner dans n'importe quel environnement biologique

La méthode PCR ne diffère pas par «assoiffé de sang», elle accepte donc tout milieu biologique contenant l’agent infectieux présumé.En général, le choix de ce qui doit être pris à des fins de recherche reste celui du médecin.

Ainsi, lors de la recherche d'un agent pathogène, en plus d'un test sanguin (bien que cela corresponde également et que, dans la plupart des cas, il soit pris parallèlement à un autre matériau), vous pouvez utiliser:

  • Frottis (écoulement du tractus urogénital);
  • Raclage des muqueuses de la cavité buccale, de la conjonctive, du nasopharynx, des voies génitales (les femmes prennent du col et du vagin, les hommes - de l'urètre);
  • La salive;
  • Le sperme;
  • Jus de prostate;
  • Tissu placentaire et liquide amniotique (liquide amniotique);
  • Les sédiments urinaires (après centrifugation), par exemple, pour détecter certaines IST et Mycobacterium tuberculosis;
  • Flegme et liquide pleural dans le même but;
  • Exsudats;
  • Liquide céphalo-rachidien pour suspicion de lésions infectieuses du système nerveux central;
  • Matériel de biopsie (bioptat), prélevé dans le foie, le duodénum, ​​l'estomac, etc.

J'aimerais ajouter à ce qui précède que le matériel à tester dans tous les cas, même dans les raclures et les excrétions, sera suffisant, car les tests par PCR ne nécessitent pas de gros volumes, il y a suffisamment de microlitres d'analyse, qui sont généralement pris dans des microtubes de type Eppendorf et envoyés à recherche.

Maladies et utilisations de la PCR

VIH et réaction en chaîne de la polymérase

Habituellement, lors d’une enquête anonyme en cas de résultats positifs de l’immunoempreinte, le diagnostic d’infection par le VIH est répété à nouveau. Si le diagnostic est confirmé, on prescrit au patient des études supplémentaires:

  1. Utilisation de réactions immunologiques pour déterminer les valeurs absolues du nombre de lymphocytes CD4 (cellules immunocompétentes - cellules T auxiliaires ou auxiliaires), que l’infection frappe en premier lieu, après quoi elles perdent leurs propriétés fondamentales et ne peuvent plus faire la distinction entre "leur" et les autres. " Ils prennent les ARN circulants du virus dans le plasma sanguin comme des cellules normales du corps et ne réagissent pas avec eux;
  2. Détection de l'ARN du virus par PCR et calcul de la concentration en particules virales afin d'établir le stade, la gravité du processus pathologique et le pronostic sur la base de ces données. Bien entendu, le mot «norme» n'existe pas à cet égard, car la réaction est toujours positive et le déchiffrement des valeurs numériques relève de la compétence du médecin.

PCR et hépatite

Les agents pathogènes de l'hépatite peuvent être détectés par PCR. Le test sert le plus souvent à diagnostiquer l'hépatite C, mal détectée par d'autres méthodes.

Le comportement du virus de l'hépatite C (contenant l'ARN) dans le corps humain ressemble à celui du VIH. Enfoncé dans le génome des cellules du foie (hépatocytes), il attend son heure, qui peut survenir après 2 ans, au moins 20 ans, si bien que les médecins l’ont qualifié de "tueur doux". L'hépatite C entraîne la formation d'un processus malin dans le parenchyme hépatique, qui se manifeste aux stades avancés. Le système immunitaire ne remarque pas tous ces événements, prenant le virus pour un hépatocyte. Il est vrai que certaines quantités d'anticorps dirigés contre le virus sont produites, mais elles ne fournissent pas une réponse immunitaire décente. Car le diagnostic de l’ELISA pour l’hépatite C n’est pas très informatif, car il indique que le virus a laissé des traces, et si lui-même est parti est inconnu. Les cas d'auto-guérison du VHC sont connus, tandis que les anticorps anti-virus demeurent et continuent à circuler à vie (mémoire immunologique). La PCR est nettement en avance sur la formation des anticorps et peut détecter une particule virale après 1-1,5 semaines, tandis que les anticorps peuvent apparaître dans une plage allant de 2 mois à six mois.

Le diagnostic PCR en cas de suspicion d’apparition du virus de l’hépatite C dans le corps humain est la méthode de recherche la plus optimale, car il est le seul à pouvoir reconnaître la présence d’un «ennemi sensible» dans le sang ou le spécimen de biopsie du patient.

Cependant, il arrive parfois que les TA soient positifs et que le résultat de la PCR soit négatif. Cela se produit parfois avec une très faible quantité de virus ou quand il est «dormant» dans le foie sans pénétrer dans le sang. Pour toujours trouver la vérité, une deuxième analyse est effectuée sur le patient, voire sur plusieurs.

Infection à papillomavirus humain

Si l’auto-guérison ne se produit pas, le HPV (virus du papillome humain) peut également, sans se manifester, persister pendant longtemps dans l’organisme hôte, ce dont on ne soupçonne même pas l’absence de PCR et l’absence de symptômes. Cependant, la présence d'une infection à papillomavirus humain, bien que latente, est loin d'être indifférente à la santé humaine, où certains types de virus qui causent le cancer sont particulièrement dangereux (types 16, 18).

Le plus souvent, la moitié féminine de la population souffre du VPH, car le virus aime davantage les organes génitaux féminins, et en particulier le col utérin, où certains types de virus contribuent au développement de processus dysplasiques, puis du cancer du col utérin, si vous ne traitez pas la dysplasie et laissez libre cours au virus. Ainsi, la réaction en chaîne de la polymérase détectera l'ADN viral, puis indiquera un type "mauvais" ou "bon" (oncogène ou non oncogène) installé dans le corps de la femme.

Autres ITS et infections à la TORCHE

De toute évidence, la réaction en chaîne de la polymérase peut trouver n’importe quelle structure étrangère constituée d’acides nucléiques. Ce test convient donc à l’identification de toutes les infections par les MST et TORCH. Toutefois, il n’est pas toujours utilisé. Pourquoi, par exemple, mener des recherches aussi coûteuses pour détecter Trichomonas ou gonocoque, s’il ya plus abordable et moins cher?

Les infections TORCH et les IST sont tellement interreliées qu'il est parfois difficile de déterminer à quel groupe un agent pathogène particulier devrait être attribué. Ils sont généralement difficiles à comprendre car il s’agit de groupes de micro-organismes très divers qui peuvent toujours se transmettre sexuellement ou dans certaines conditions (déficit immunitaire) et qui peuvent ne présenter d’intérêt que pendant la grossesse, en raison de l’impact négatif qu’ils peuvent avoir sur son évolution et sur le fœtus.

PCR - la principale méthode de détection des infections cachées

Le développement des manifestations cliniques repose sur divers agents pathogènes, qui ne peuvent être détectés que par la PCR, qui est sa tâche principale, parfois en association avec ELISA, et parfois en tant que seul test de confirmation, en particulier en l'absence de symptômes de la maladie. Une situation aussi difficile peut créer une infection polymicrobienne qui, en plus des agents causaux manifestes, inclut également des agents pathogènes opportunistes.

Chez les hommes souffrant de maladies inflammatoires de la sphère génitale, on détecte souvent de l'urétrite, de la chlamydia, de l'urée-plasmagène et du mycoplasme. Ces mêmes types sont dangereux et le corps féminin. Ceux qui connaissent la perfidie de la chlamydia et qui l’ont rencontrée se souviendront sûrement de la difficulté de la trouver et de la reconnaître. L’analyse par PCR de la chlamydia est donc particulièrement fiable car le parasite caché dans une cellule de très petite taille se comporte prudemment et nuit toujours. subrepticement.

Ureaplasma est souvent considéré comme associé à un mycoplasme. Et ce n'est pas un hasard. Ces espèces, comme la chlamydia, ne sont pas classées comme virus ou bactéries, elles vivent dans les cellules et appartiennent aux IST, bien que leur présence dans un organisme sain soit également loin d’être rare. Ainsi, afin de distinguer un porteur en bonne santé d'un malade, des méthodes spéciales sont nécessaires lorsque la PCR est considérée comme la plus fiable, car, en raison de la nature de la structure et du comportement de ces micro-organismes, d'autres études sont inefficaces.

En ce qui concerne le virus de l’herpès (type 1, 2) et le cytomégalovirus, qui appartient également aux virus de l’herpès (type 5), la situation est également ambiguë. L’infection de la population mondiale approche les 100%, c’est pourquoi, dans ce cas, l’identification du virus et de sa dose est très importante, ce qui joue surtout un rôle pendant la grossesse, car un adulte qui a pris racine dans son corps ne cause souvent aucun trouble ni aucun signe de la maladie.

Par conséquent, un examen similaire prescrit par un médecin ne doit pas être ignoré, car dans certains cas, la réaction en chaîne de la polymérase est une méthode indispensable et nécessaire de diagnostic en laboratoire qui peut protéger non seulement une femme, mais également une petite personne à naître de complications graves.

En conclusion, je voudrais noter qu’une méthode aussi merveilleuse, comme la PCR, sert l’humanité depuis plus de 30 ans. Dans le même temps, les tâches de test ne se limitent pas à la recherche d'agents infectieux. La réaction en chaîne de la polymérase, née sur la base de la biologie moléculaire, est inextricablement liée à la génétique. Elle est utilisée avec succès en criminalistique pour identifier des personnes, en médecine légale pour établir la paternité, en médecine vétérinaire, si une clinique vétérinaire a la capacité d’acheter un équipement coûteux, ainsi que dans d’autres domaines ( industrie, agriculture, etc.).

Ptsr c'est quoi

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR, PCR) a été inventée en 1983 par Cary Müllis (scientifique américain). Par la suite, il a reçu le prix Nobel pour cette invention. Actuellement, le diagnostic PCR est l’une des méthodes les plus précises et les plus sensibles pour diagnostiquer les maladies infectieuses.

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est une méthode expérimentale de biologie moléculaire, une méthode permettant d’augmenter considérablement les faibles concentrations de certains fragments d’acide nucléique (ADN) dans du matériel biologique (échantillon).

La méthode de la PCR repose sur le doublement répété d'une certaine section de l'ADN à l'aide d'enzymes in vitro. En conséquence, l’ADN accumulé est suffisant pour la détection visuelle. Lorsque cela se produit, seule la zone répondant aux conditions spécifiées est copiée, et uniquement si elle est présente dans l'échantillon à l'étude.

En plus d'augmenter simplement le nombre de copies d'ADN (ce processus s'appelle l'amplification), la PCR permet de nombreuses autres manipulations avec du matériel génétique (introduction de mutations, épissage de fragments d'ADN) et est largement utilisée dans les pratiques biologiques et médicales, par exemple pour diagnostiquer des maladies (héréditaires, infectieuses)., établir la paternité, cloner des gènes, introduire des mutations, isoler de nouveaux gènes.

Spécificité et application

La PCR vous permet de diagnostiquer la présence d'agents pathogènes à croissance longue sans recourir à des méthodes microbiologiques fastidieuses, ce qui est particulièrement important en gynécologie et en urologie pour le diagnostic des infections sexuellement transmissibles (IST) urogénitales.

Cette méthode permet également de diagnostiquer les infections virales telles que l'hépatite, le VIH, etc. La sensibilité de la méthode est beaucoup plus grande que celle des méthodes immunohomiques et microbiologiques, et le principe de la méthode vous permet de diagnostiquer la présence d'infections présentant une variabilité antigénique importante.

La spécificité de la PCR utilisant la technologie PCR, même pour toutes les infections virales, à chlamydia, à mycoplasmes, à ureaplasma et dans la plupart des autres infections bactériennes, atteint 100%. La méthode PCR permet de détecter même des cellules individuelles de bactéries ou de virus. Les diagnostics par PCR détectent la présence d'agents infectieux dans les cas où cela ne peut être fait par d'autres méthodes (immunologiques, bactériologiques, microscopiques).

La méthode PCR est particulièrement efficace pour diagnostiquer les formes de microorganismes existants difficiles à cultiver, non cultivées et cachées que l’on rencontre souvent dans les infections latentes et chroniques, dans la mesure où cette méthode évite les difficultés associées à la croissance de ces microorganismes en laboratoire.

L'utilisation du diagnostic PCR est également très efficace contre les agents pathogènes à forte variabilité antigénique et les parasites intracellulaires. En utilisant la PCR, il est possible d'identifier les agents pathogènes non seulement dans le matériel clinique obtenu du patient, mais également dans le matériel obtenu à partir d'objets environnementaux (eau, sol, etc.). Dans la pratique urologique et gynécologique - pour identifier la chlamydia, l’ureaplasmose, la gonorrhée, l’herpès, la gardnerellose, l’infection à mycoplasmes, le VPH - papillomavirus humain; en pneumologie - pour le diagnostic différentiel de pneumonie virale et bactérienne, tuberculose; en gastro-entérologie - pour identifier une hélicobactériose; dans la clinique des maladies infectieuses - comme méthode rapide pour le diagnostic de la salmonellose, de la diphtérie, de l'hépatite virale B, C et G; en hématologie - pour la détection de l'infection à cytomégalovirus, oncovirus.

La spécificité de la PCR repose sur la formation de complexes complémentaires entre la matrice et les amorces - oligonucléotides synthétiques courts de 18 à 30 lettres. Chacune des amorces est comparable (complémentaire) à l'une des chaînes de la matrice à double brin, encadrant le début et la fin de la région amplifiée.

Après connexion (hybridation) de la matrice avec l'amorce (annelage), cette dernière sert d'amorce pour l'ADN polymérase lors de la synthèse de la chaîne complémentaire de la matrice.

  • Matrice d'ADN contenant l'ADN qui doit être amplifié;
  • deux amorces complémentaires des extrémités du fragment souhaité;
  • ADN polymérase thermostable;
  • les désoxynucléotides triphosphates (A, G, C, T);
  • Ions Mg2 + nécessaires au fonctionnement de la polymérase;
  • solution tampon.

La PCR est effectuée dans l’amplificateur - un dispositif qui assure un refroidissement et un chauffage périodiques des tubes, avec une précision d’au moins 0,1 ° C. Pour éviter l'évaporation du mélange réactionnel, une huile à haut point d'ébullition, par exemple de l'huile de vaseline, est ajoutée au tube. L'ajout d'enzymes spécifiques peut augmenter le rendement de la réaction PCR.

Lorsque les chaînes ont divergé, la température est abaissée afin que les amorces puissent se lier à la matrice simple brin. Cette étape s'appelle recuit. La température de recuit dépend des amorces et est généralement choisie 4 à 5 ° C en dessous de leur point de fusion. Temps de scène - 0,5 à 2 minutes.

L'ADN polymérase réplique le brin matrice en utilisant l'amorce comme germe. C'est la phase d'élongation. La température d'élongation dépend de la polymérase. Les polymérases fréquemment utilisées sont les plus actives à 72 ° C. Le temps d'élongation dépend à la fois du type d'ADN polymérase et de la longueur du fragment amplifié. Habituellement, le temps d’élongation est égal à une minute pour mille paires de bases. Après la fin de tous les cycles, une étape supplémentaire supplémentaire d'élongation est souvent effectuée afin d'achever la construction de tous les fragments à chaîne unique. Cette étape dure 10 à 15 minutes.

Dictionnaire

ADN - acide désoxyribonucléique - un polymère biologique, l'un des deux types d'acides nucléiques, assurant le stockage, la transmission de génération en génération et la mise en œuvre d'un programme génétique pour le développement et le fonctionnement d'organismes vivants. Le rôle principal de l'ADN dans les cellules est le stockage à long terme d'informations sur la structure de l'ARN et des protéines.

ARN - acide ribonucléique - un polymère biologique dont la structure chimique est semblable à celle de l’ADN. Une molécule d'ARN est construite à partir des mêmes unités monomériques - nucléotides que l'ADN. Dans la nature, l'ARN, en règle générale, existe sous la forme d'une chaîne unique. Dans certains virus, l'ARN est un vecteur d'informations génétiques. Dans la cellule joue un rôle important dans le transfert d'informations de l'ADN à la protéine. L'ARN est synthétisé sur une matrice d'ADN. Ce processus s'appelle la transcription. Il existe dans l'ADN des zones contenant des informations responsables de la synthèse de trois types d'ARN de fonctions différentes: ARN informatif ou messager (ARNm), ribosomal (ARNr) et transport (ARNt). Les trois types d'ARN, d'une manière ou d'une autre, sont impliqués dans la synthèse des protéines. Cependant, les informations sur la synthèse des protéines ne sont contenues que dans l'ARNm.

Les nucléotides sont la principale unité récurrente dans les molécules d'acide nucléique, le produit du composé chimique d'une base azotée, du sucre à cinq carbones (pentose) et d'un ou plusieurs groupes phosphate. Les nucléotides présentés dans les acides nucléiques contiennent un groupe phosphate. Ils sont appelés par leur base azotée - adénine (A), contenant l'adénine, la guanine (G) - guanine, la cytosine (C) - cytosine, la thymine (T) - thymine, l'uracile (U) - uracile. L'ADN contient 4 types de nucléotides - A, T, G, C, l'ARN inclut également 4 types - A, U, G, C. Le sucre dans la composition de tous les nucléotides d'ADN est le désoxyribose, l'ARN-ribose. Lorsque des acides nucléiques sont formés, les nucléotides, par liaison, forment un squelette sucre-phosphate de la molécule sur lequel se trouvent des bases.

L'amorce est un ADN court utilisé pour répliquer la chaîne de matrice. Chacune des amorces est complémentaire de l'une des chaînes de la matrice double brin, encadrant le début et la fin de la région amplifiée.


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