Utilisation du diagnostic PCR

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La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) en biologie moléculaire est une méthode expérimentale de détection des virus. Il vous permet d’augmenter considérablement la concentration de certains fragments d’acide nucléique (ADN) dans des échantillons de matériel biologique, ce qui permet de les déterminer (reconnaître) et de les compter.

L'analyse est effectuée comme suit. Du matériel génétique (un échantillon de sang), qui peut potentiellement inclure le gène souhaité, est introduit dans le tube. Des amorces sont également placées - des segments synthétisés chimiquement d’une petite longueur du gène souhaité.

Un ADN ou une ARN polymérase est également ajouté dans le vaisseau, ce qui permet d’aligner une chaîne d’acides nucléiques complètement identique à celle de l’origine. La composition résultante est injectée et un ensemble de quatre nucléotides libres - un matériau de construction spécial pour l'ARN ou l'ADN, dont l'un contient des particules de phosphore radioactives.

Le mélange obtenu est chauffé à 95–96 ° C. C'est pourquoi deux hélices d'ADN, qui sont normalement entrelacées, sont tissées. Ensuite, le médicament est refroidi et les amorces se fixent à la région souhaitée du génome viral, empêchant l’ARN (ou l’ADN) de former à nouveau une double hélice.

En cours de refroidissement, la polymérase recherche une chaîne de nucléotides libre. Pour le fonctionnement de cette enzyme, une seule chaîne de nucléotides est nécessaire. Comme la polymérase glisse le long de la chaîne d’ADN (comme un anneau sur une corde), elle n’est pas capable de travailler sur une double hélice.

Ensuite, un cycle de chauffage répété est effectué, ce qui permet de séparer les chaînes de nucléotides. À chacun de ces cycles de PCR, la quantité dans l'échantillon du gène d'hépatite souhaité augmente de manière exponentielle, et le reste du matériel génétique est produit (se développe) de manière linéaire.

Après purification de la solution à partir des résidus de nucléotides et séparation par électrophorèse des chaînes d'ADN par le paramètre de poids moléculaire, on peut facilement déterminer s'il existe ou non un gène souhaité dans l'échantillon étudié.

Avantages de la PCR

Les tests de laboratoire utilisant la PCR permettent d'obtenir encore plus d'informations que la présence de l'ARN du virus. En déterminant le paramètre du niveau de rayonnement radioactif, il est possible d'identifier la quantité de matériel génétique qui était à l'origine contenue dans l'échantillon étudié. Dans le cas de l'hépatite B, déterminez l'indicateur de charge virale

Un autre avantage de cette méthode est le très haut degré de sensibilité de la réaction CR. Il est beaucoup plus élevé que les méthodes classiques de détection de virus. Idéalement, pour identifier le gène souhaité, pour la PCR, un seul virus dans l'échantillon suffit.

De plus, la PCR est complètement spécifique. Ses amorces sont conçues de manière à correspondre pleinement aux régions uniques des gènes souhaités qu'aucune autre séquence ne possède. Comme les empreintes digitales sont uniques, il existe des séquences de nucléotides uniques dans chaque gène.

Analyse qualitative de la PCR

L'analyse qualitative vous permet d'identifier uniquement la présence d'un virus dans le sang. Ce test doit être effectué chez tous les patients chez qui des anticorps anti-hépatite C ont été détectés dans le sang. Il ne peut en résulter que l'une des deux valeurs suivantes: «détecté» ou «non détecté». Chez une personne en bonne santé, la norme (valeur de référence) doit être "non détectée".

Il existe une interprétation particulière de ces résultats de la recherche qualitative:

  • Le résultat est "détecté". Cela signifie qu'un fragment d'ARN spécifique au virus de l'hépatite C a été trouvé dans l'échantillon de matériel biologique prélevé analysé. Par conséquent, le patient est infecté par le virus de l'hépatite C. Si le résultat d'une PCR de haute qualité est «détecté», cela indique que le virus se multiplie et à ce moment, il infecte de nouvelles cellules du foie dans le corps.
  • Le résultat est "non détecté". Un tel verdict indique que dans l'échantillon de matériel biologique obtenu dans ce laboratoire et analysé, aucun fragment d'ARN spécifique du virus de l'hépatite C n'a été trouvé, mais que la concentration en ARN de l'infection par l'agent pathogène était inférieure à la limite de sensibilité du test.

Dans la phase aiguë de l'ARN du virus de l'hépatite C, de telles études qualitatives par la méthode PCR peuvent être détectées dès 1-2 semaines immédiatement après l'infection du corps, c'est-à-dire bien avant l'apparition des anticorps anti-hépatite.

Des résultats de test inexacts de cette étude peuvent être obtenus par:

  • biomatériau contaminé;
  • la présence d'héparine dans le sang du patient;
  • la présence dans l'échantillon de substances chimiques ou protéiques (inhibiteurs) agissant sur les divers composants de la PCR.

Pour effectuer une analyse qualitative de la PCR, aucune préparation spéciale du patient pour l’étude n’est requise. Le sang veineux est utilisé comme matériau.

Evaluation des résultats

Les tests PCR de haute qualité ont un certain degré de sensibilité et, en fonction de la précision des recherches et du niveau d’équipement du laboratoire, ils peuvent varier de 10 à 500 UI / ml.

Cela signifie que si le virus dans l'échantillon de sang est présent à une très faible concentration (inférieure à la valeur seuil de la sensibilité de ce laboratoire), le résultat peut alors être déterminé comme "non détecté" chez un patient patient. Pour cette raison, lors de l'analyse qualitative de la PCR avec un faible niveau de virémie (faible concentration de virus), par exemple, pour les patients sous traitement antiviral, il est très important de connaître le seuil de sensibilité de ce système de diagnostic.

Variantes de systèmes de diagnostic

Pour contrôler la réponse virologique, il est recommandé d'utiliser des systèmes de diagnostic avec un seuil de sensibilité d'au moins 50 UI / ml pour un traitement antiviral. Ces critères sont satisfaits, par exemple, avec les analyseurs Cobas Ampicolor HCV-Test (exacts à 50 UI / ml), ainsi qu'avec l'ARN RealBest HCV (avec une sensibilité de 15 UI / ml).

Selon les recommandations de l’OMS, pour établir un diagnostic définitif de l’hépatite C, il est nécessaire de se baser uniquement sur la base d’une triple détection du RNA du virus C dans les échantillons de sérum du patient, en l’absence d’autres variétés de marqueurs de l’hépatite.

Outre les méthodes de PCR, un test TMA (méthode d'amplification de la transcription) est également utilisé pour détecter l'ARN du VHC chez les patients. Son seuil de sensibilité est optimal (5 à 10 UI / ml), mais dans notre pays une telle méthode de test n’est pas encore très répandue.

Gamme de modifications de virus détectables

Une telle détermination qualitative dans le sérum de la présence d'ARN du virus de l'hépatite C permet de déterminer plusieurs génotypes de ce virus. Actuellement, la science connaît plus de six génotypes de ce virus, ainsi que près de 10 sous-types de cette maladie.

Dans notre pays, les virus communs 1, 2, 3 génotypes. Les laboratoires peuvent détecter les génotypes suivants: 1a et 1b, 2a, 2b et 2c, ainsi que 3, 4, 5a et 6, quels que soient leurs sous-types. Pour toutes les modifications de virus, la spécificité de la détection est de 100%.

Analyse quantitative par PCR

À l'aide d'un test PCR quantitatif, on détermine le niveau de concentration du virus de l'hépatite dans des échantillons de sang (charge virale). Ce test de virémie (concentration en virus) vous permet de déterminer le nombre d'unités d'un certain matériel génétique (l'ARN le plus viral), qui est détecté dans une certaine quantité. Dans ce cas, déterminez sa concentration en 1 ml, ce qui correspond à 1 cu. voir

Les paramètres quantitatifs de l'analyse sont exprimés sous forme de chiffres; à cet effet, les unités internationales (UI) par millilitre (ml), appelées UI / ml, sont utilisées comme unités de mesure. Or, dans certains laboratoires, la quantité de virus peut être déterminée dans d'autres unités: le nombre de copies par ml est indiqué en copies / ml.

  • Dates: pour l’hépatite C, une telle analyse quantitative de la PCR est effectuée immédiatement avant le début du traitement. Puis les 1ère, 4ème, 12ème et 24ème semaines. L'évaluation à la 12e semaine est indicative, elle permet de déterminer l'efficacité du traitement.
  • Préparation à l'analyse. Pour effectuer une analyse quantitative de la PCR, aucune préparation spéciale du patient pour l'étude n'est requise. Une demi-heure avant l'échantillonnage ne devrait pas fumer. Le sang veineux est utilisé comme matériel de laboratoire.

Evaluation des résultats

Pour différents systèmes de test de laboratoire, il existe différents facteurs de conversion pour cet indicateur en UI / ml. En moyenne, ils prennent un paramètre de conversion, dans lequel 4 copies / ml = 1 UI / ml. Ainsi, si le laboratoire donne le résultat de l'analyse PCR, 2,4 * 10 6 copies / ml, ce paramètre doit être divisé en 4 et nous obtiendrons 6 * 10 5 UI / ml.

Une charge de 800 000 UI / ml est considérée comme élevée, ce qui correspond approximativement à 3 000 000 copies / ml. Selon certains auteurs, une faible virémie correspond aux paramètres de la PCR quantitative inférieurs à 400 000 UI / ml.

À la suite du test quantitatif, les résultats finaux peuvent être fournis non pas sous forme de valeur numérique, mais: «en dessous de la plage de mesure» ou «non détectée».

  • Evaluation: "en dessous de la plage de mesure." Cela suggère que le test quantitatif n'a pas pu détecter l'ARN du virus de l'hépatite C, mais que le virus lui-même est présent dans le corps à de très faibles concentrations. Ceci est mis en évidence par un test qualitatif supplémentaire confirmant la présence du virus.
  • Note: non détecté. Ce résultat indique que le test quantitatif n'a pas été trouvé dans l'échantillon d'ARN du virus.

Le paramètre de la charge virale, tout d’abord, détermine le degré de contagiosité de la maladie, le niveau de "contagiosité" du patient. Plus la concentration de virus du patient est élevée, plus grande est la probabilité de le transmettre à d’autres personnes. Par exemple, lors d'un rapport sexuel avec une personne malade ou verticalement. Cet indicateur quantitatif permet également de déterminer l'efficacité du traitement du patient.

Effectuer une analyse quantitative du CCP est important pour la thérapie antivirale, en évaluer le succès et planifier la durée du cours. Ainsi, avec une réponse rapide du corps au traitement et un faible degré de virémie, la durée du traitement peut être raccourcie.

Si le paramètre de PCR quantitative est lentement réduit, le traitement antiviral doit être prolongé ou modifié. Si le niveau de charge virale est faible, il s'agit d'un facteur favorable au traitement, mais s'il est élevé, la méthode de traitement utilisée est inefficace et les médicaments ou les méthodes d'utilisation doivent être modifiés.

Analyse qualitative de l'hépatite C

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Une analyse qualitative de la réaction en chaîne de la polymérase - La PCR pour l'hépatite C détermine la présence ou l'absence de VHC dans le corps. En laboratoire, la structure de l'ARN, incluant le virus, est étudiée. En cas de détection du virus C, il est nécessaire de suivre un traitement, car l’état négligé du foie aura des conséquences graves. Une PCR de haute qualité est également effectuée après la récupération pour confirmer l'absence d'anticorps. Assigné pour l'inspection de routine. Avec une faible concentration de l'agent causal dans le sang, la PCR (qualitative) peut ne rien détecter du fait que le système de diagnostic a ses propres seuils de sensibilité. Dans le cas du stade initial de la maladie ou de la forme bénigne, les ultra-diagnostics par PCR sont effectués sur un équipement ultra-sensible.

Qu'est-ce que le virus à ARN?

Le terme ARN du virus de l'hépatite C (ou ARN du virus de l'hépatite C) désigne la maladie du foie elle-même. Le virus C se lie à la cellule saine du corps en pénétrant à l'intérieur. Au fil du temps, se répandant dans tout le corps, il suffit de pénétrer dans le sang. En conséquence, l'agent pathogène pénètre dans le foie, fusionne avec ses cellules et travaille dur. Les cellules hépatiques (hépatocytes) travaillent sous son influence, subissent des modifications et en meurent. Plus le virus C reste longtemps dans le foie, plus le nombre de cellules meurent. Au fil du temps, développez des maladies dangereuses qui entraînent une dégénérescence maligne et la mort.

L'infection du foie par ce type de virus peut ne pas se manifester de l'extérieur. Pendant de nombreuses années ou décennies, une personne infectée se sent complètement en bonne santé et seul un examen aléatoire révèle le plus souvent une pathologie. Lors du don de sang pour l'hépatite, une partie de la chaîne d'ARN (acide ribonucléique), qui fait partie du gène humain (ADN), est examinée. Les résultats des tests de laboratoire ne doivent pas être utilisés pour l'auto-traitement, car il ne s'agit que d'un indicateur. L'image exacte et le diagnostic ultérieur sont mieux déterminés par le médecin.

Une fois terminé: indications pour la recherche

Pour confirmer le VHC, une analyse PCR est effectuée (réaction en chaîne de la polymérase). Les études de PCR aident à trouver le matériel pathogène dans la structure de l'ARN et à prescrire un traitement efficace. Nommé dans les cas suivants:

  • détection de signes d'inflammation du foie;
  • études de dépistage pour la prévention;
  • examen des personnes en contact;
  • diagnostic d'hépatite d'origine mixte (détermination du principal agent pathogène);
  • déterminer le niveau d'activité de reproduction du virus dans la forme chronique;
  • cirrhose du foie;
  • déterminer l'efficacité du traitement prescrit.
Les études de PCR sont prescrites par un médecin afin de déterminer l'efficacité d'un traitement pour l'hépatite.

Il existe une analyse qualitative et quantitative de la PCR. La PCR quantitative montre le ratio de pourcentage d'ARN par le nombre de porteurs de virus dans le sang et qualitative indique la présence ou l'absence de virus. Un indicateur de qualité positif (présence d'ARN de l'hépatite C) nécessite également des recherches quantitatives. Un niveau élevé de concentration de l'agent responsable de l'hépatite C est associé au risque de transmission, c'est-à-dire d'infection de tiers. Un faible nombre est mieux traitable. La quantité de virus à ARN dans le sang n’est pas liée à l’intensité de la maladie. Une analyse par PCR est également effectuée dans le cas d'un traitement par interféron afin de prescrire la durée et la complexité du traitement.

Caractéristiques de l'analyse PCR de haute qualité pour l'hépatite C

Une analyse qualitative avec l'indice de réaction en chaîne de la polymérase est attribuée à tous les patients présentant des anticorps dans le sang pour l'hépatite C. Ceux qui ont été guéris et qui sont guéris doivent repasser le test. Il est recommandé de réussir le test de dépistage de l'hépatite B, puis, en cas de conclusion positive, et de l'hépatite D. En outre, la réaction analysée qualitativement doit être réalisée en association avec d'autres tests sanguins. Les analyses fourniront une image complète de la propagation virale.

D'après les résultats du test, seul un test positif pour l'hépatite C sera visible ou négatif, c'est-à-dire la présence ou l'absence d'un virus. Si la sortie est "détectée", le virus est et reste actif. La désignation "non détecté" indique l'absence de virus ou sa petite quantité. Avec cet indicateur, il convient de garder à l'esprit que la sensibilité analytique des systèmes de diagnostic est différente et que l'hépatite C à ARN peut encore être dans le sang, mais ne se manifeste pas dans l'analyse.

La méthode PCR particulièrement sensible ultra-hépatite C révèle même de faibles quantités. Une étude d'hybridation par fluorescence est utilisée, qui est plusieurs fois supérieure aux systèmes de PCR standard. La méthode est utilisée dans plusieurs cas:

  • formes présumées cachées de l'hépatite C;
  • Le diagnostic PCR n'a pas confirmé l'agent pathogène, mais il existe des anticorps.
  • en cas de récupération;
  • détecter une infection précoce.
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Analyse de décodage

Le décodage PCR du VHC affecte la décision finale lors du diagnostic, en particulier avec la méthode ultramétode. Le principal inconvénient de cette étude est le strict respect des conditions de stérilité pour l’échantillon et le matériel. Une légère déviation montre parfois des conclusions analytiques inexactes, complique le diagnostic et le traitement ultérieur. L'analyse de la PCR pour la détermination de l'ARN de l'hépatite ne donne pas toujours une image fiable de la maladie, des imprécisions sont parfois permises, et dans les deux sens.

Pour diagnostiquer le virus de l'hépatite, il est recommandé d'utiliser un examen complet.

Norme des indicateurs

L’absence d’anticorps JgM contre l’hépatite virale C dans les résultats de l’étude est considérée comme la norme dans l’analyse de la réaction en chaîne de la polymérase. Dans le même temps, les résultats de l'analyse sérologique indiquent la présence d'anticorps anti-virus C, ce qui se situe également dans les limites de la normale. Une définition qualitative ne montre pas l’intensité de la maladie, elle révèle seulement l’agent responsable de l’hépatite C dans l’ARN. Cette analyse est répétée après le traitement pour confirmer la récupération réelle.

Déviations

Si des anticorps anti-JVM anti-JVM sont présents, cela indique une infection en développement. La maladie dans le même temps se développe de manière aiguë ou chronique, se manifestant à différents stades. Si une diminution du nombre d'anticorps est enregistrée, l'analyse indiquera que les résultats du traitement ont été obtenus pendant la récupération. Le diagnostic ne révèle que de très rares cas de faux positifs. On les trouve chez les femmes pendant la grossesse et chez les personnes atteintes d'autres maladies infectieuses.

Diagnostic de l'hépatite C à l'aide d'études PCR

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est de plus en plus utilisée en pratique clinique pour déterminer les causes de diverses maladies virales, y compris le diagnostic de l'hépatite virale C.

Conseils d'hépatologues

En 2012, le traitement de l'hépatite C a connu une avancée décisive. De nouveaux médicaments antiviraux à action directe ont été mis au point. Avec une probabilité de 97%, ils vous débarrassent complètement de la maladie. L'hépatite C est désormais officiellement considérée comme une maladie entièrement traitable dans la communauté médicale. Dans la Fédération de Russie et les pays de la CEI, les médicaments sont représentés par le sofosbuvir, le daclatasvir et le ledipasvir. À l'heure actuelle, il y a beaucoup de contrefaçons sur le marché. Les médicaments de bonne qualité ne peuvent être achetés qu’à des sociétés agréées et à la documentation pertinente.
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Pour son diagnostic, la PCR est activement utilisée dans ses diverses modifications. Avec l'aide de la PCR pour l'hépatite C, il est possible d'établir le fait de la présence dans le sang du patient de l'ARN du virus de l'hépatite C et de diagnostiquer avec précision.

Variations d'analyse

La technique de PCR a été mise à la disposition des médecins il y a plusieurs décennies. Elle repose sur la copie multiple d'un fragment spécifique d'ARN ou d'ADN viral ou bactérien, suivie d'une détection (reconnaissance de ce fragment) dans le sérum sanguin du patient.

Il existe deux méthodes fondamentalement différentes pour la recherche sur la PCR: quantitative et qualitative.

La méthode qualitative permet uniquement de répondre à la question: le matériel biologique (sérum, salive, liquide séminal, etc.) contient-il le matériel génétique d'un virus donné?

La méthode quantitative, quant à elle, permet de déterminer la quantité de ce matériel génétique, nécessaire dans certains cas pour déterminer le stade de la maladie ou pour évaluer l'efficacité du traitement.

Version qualitative de la PCR dans la maladie

L'utilisation d'une variante qualitative de l'analyse PCR dans cette maladie permet de détecter la présence d'ARN de l'hépatite virale C dans les fluides biologiques (sérum sanguin, salive, etc.) du patient. Dans ce cas, le résultat de l'analyse ne peut être que de deux types: positif ou négatif. Il est très important dans ce cas, son décodage correct.

  • un résultat positif dans la détermination de l'ARN de l'hépatite C virale indique au médecin que le virus en question est dans le liquide biologique à l'étude. En conséquence, le patient en est infecté et un diagnostic d'hépatite virale est donc possible, mais il est toujours utile de se rappeler la possibilité de résultats de tests faussement positifs;
  • un résultat négatif de l'analyse PCR indique l'absence d'ARN du virus de l'hépatite C dans le fluide biologique étudié, ou le contenu en molécules d'ARN dans le fluide à tester était trop petit et se situait sous la limite de sensibilité de la méthode PCR. Un résultat de test négatif peut ne pas toujours indiquer l'absence de virus dans le sang. Le médecin traitant doit toujours envisager la possibilité d’une analyse fausse négative.

Avec le développement de la forme aiguë de l'hépatite C, la réalisation d'études PCR de haute qualité peut établir le fait que la maladie est présente dès 1 à 3 semaines après l'entrée du virus dans le corps humain.

De faux résultats négatifs peuvent résulter de:

  • pénétration dans le matériel biologique (sang) de substances polluantes;
  • l'utilisation d'héparine pour empêcher la coagulation du sang dans le tube ou son utilisation par le patient;
  • pénétration de substances de l'environnement dans le matériel d'essai bloquant les enzymes utilisées dans la PCR.

Le patient n'a pas à se conformer à des recommandations spéciales avant de procéder à une méthode qualitative de diagnostic PCR. Pour ce faire, il vous suffit de prélever du sang dans la veine du patient pour analyse.

Option PCR quantitative

L’utilisation de l’analyse quantitative de la PCR permet de déterminer non seulement la présence d’un virus dans le sang, mais également la quantité de particules virales présentes dans n’importe quel fluide biologique (appelée charge virale). En utilisant ce type de PCR, vous pouvez déterminer le nombre de copies de l'ARN du virus de l'hépatite C qui circulent dans un certain volume.

Le résultat de ce type de PCR est exprimé en valeurs numériques, l'unité étant l'unité internationale par millilitre - UI / ml.

Ce type de diagnostic PCR est utilisé à certains jours du traitement de l'hépatite virale C. La première définition de la charge virale est celle qui survient lorsqu'un malade tombe dans un hôpital. Une analyse plus poussée est effectuée les 1ère, 4ème, 12ème et 24ème semaines du début de l’utilisation des médicaments. Dès la 12e semaine, nous pouvons dire si le traitement est efficace ou non.

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Préparer spécialement le patient pour l'étude n'est pas nécessaire. Il est recommandé de ne pas fumer le jour de l'analyse. Le sang d'une veine est utilisé comme matériel de test.

Une fois la PCR quantitative réalisée, il est nécessaire de traduire les résultats obtenus. La notion de "norme" n'existe pas dans de tels cas. Pour le décodage, une gradation d'indicateurs spécialement développée est utilisée:

  • résultat de la recherche: non détecté - l'ARN de l'hépatite virale C n'a pas été détecté dans le sang veineux du patient (résultat négatif), ou il est contenu dans une quantité très faible qui ne permet pas à la méthode de le déterminer (5 ME / ml - un résultat de test positif. Ce niveau de charge virale est très élevé. C'est un indicateur de l'efficacité du traitement et de l'évolution de la maladie;
  • résultat du test:> 8 * 10 5 ME / ml - résultat positif. Le niveau de charge est très élevé. Mauvais pronostic de la maladie et nécessité de corriger ou de remplacer les médicaments utilisés.

Il est important de se rappeler que le niveau de charge virale obtenu ne reflète pas la gravité de la pathologie et le degré de destruction du foie. Pour cela, il existe d'autres méthodes de recherche biochimique. Pour sélectionner correctement les méthodes de traitement, il est nécessaire de connaître le génotype du virus de l'hépatite C.

Ce qui montre la charge virale:

  1. Une concentration élevée de particules virales dans les liquides biologiques, en particulier dans le sang, est associée à un risque élevé de transmission du virus pendant les rapports sexuels ou pendant la grossesse de la mère au fœtus.
  2. Le nombre de particules virales reflète l'efficacité des médicaments utilisés et vous permet de sélectionner rationnellement les médicaments et les doses utilisés.

Méthode de diagnostic PCR ultra-sensible

Aujourd'hui, il est possible de faire appel à l'ultra PCR pour déterminer le virus de l'hépatite C. Cette méthode s'appelle complètement PCR avec une étude d'hybridation-fluorescence en temps réel.

Quand ultra PCR est indiqué:

  1. En cas de suspicion d'hépatite virale C chez les patients présentant des formes cachées de la maladie.
  2. Dans les cas où le patient a des anticorps anti-virus de l'hépatite C, mais non confirmés par le diagnostic PCR.
  3. Pour évaluer l'efficacité du traitement et confirmer le fait de la récupération.
  4. Comme technique de dépistage pour la détection précoce de la maladie chez les personnes de la population.

Pour l'étude, habituellement utilisé le sang veineux du patient. La sensibilité de la méthode ultra est inférieure à 10 UI / l, ce qui est plusieurs fois plus élevée que les variantes quantitatives et qualitatives standard du diagnostic PCR. Ultra PCR est administré par un médecin spécialiste des maladies infectieuses ou un hépatologue.

L’étape cruciale du diagnostic et de l’évaluation du traitement est l’interprétation correcte des résultats obtenus par ultra-PCR. Il est toujours utile de rappeler qu'il existe une faible probabilité d'obtenir des résultats faux négatifs et faux positifs.

Pour éliminer de telles situations, il est nécessaire d’exclure la contamination des échantillons de sang et du matériel de laboratoire. Avec l'utilisation de l'ultra PCR, il est possible d'éviter les situations qui conduisent à des résultats faussement négatifs, ce qui complique le diagnostic.

Analyse quantitative de la PCR pour l'hépatite C

Il existe de nombreux sous-types de VHC, ce qui explique pourquoi il n'est pas toujours possible de sélectionner des médicaments antiviraux efficaces et d'obtenir les résultats souhaités en matière de traitement. Une variété d'agents pathogènes en raison de leur capacité à changer leur structure, c'est-à-dire à muter. En conséquence, l'immunité n'a pas le temps de former une réponse puissante contre l'agent pathogène et les médicaments sont inefficaces.

L'hépatite est souvent diagnostiquée au stade de la cirrhose, ce qui prédispose à la détection tardive de la maladie en raison de l'absence de signes cliniques. Ce n'est que par des recherches en laboratoire que le VHC peut être détecté pendant la période d'incubation.

Une analyse quantitative de l'hépatite C permet non seulement d'établir la présence de l'agent pathogène dans le sang, mais également de calculer sa concentration.

Recommandations pour préparer l'analyse

Une préparation spécifique pour le diagnostic de laboratoire n'est pas nécessaire. Il suffit d'adhérer aux recommandations suivantes:

  1. l'analyse quantitative est effectuée à jeun, au dernier repas - 8 heures avant le prélèvement de sang;
  2. pendant deux jours, vous devriez abandonner l'alcool et les plats "lourds";
  3. Les médicaments que prend le patient revêtent une importance particulière. Ils peuvent affecter les résultats de l’étude, le médecin doit donc les connaître.

Les exercices lourds et les procédures physiothérapeutiques à la veille du prélèvement sanguin ne sont pas non plus souhaitables. Pour déchiffrer l'analyse quantitative de l'hépatite C s'est avérée fiable, ne négligez pas les recommandations ci-dessus.

Souvent, le patient reçoit le résultat de l'analyse en une journée. Le prix de l'étude visant à déterminer la concentration de l'agent pathogène dans le sang dépend du laboratoire et de la qualité des réactifs et peut atteindre 4 000 roubles.

Diagnostic de laboratoire de l'hépatite C

Parmi les principales méthodes de diagnostic, citons l’analyse ELISA, ou dosage immuno-absorbant lié à une enzyme. Il est prescrit pour la détection d'anticorps spécifiques du VHC. Son efficacité atteint 95%. Si la transcription de l'étude donne un résultat positif, il convient de suspecter la présence de l'agent pathogène dans le sang.

Notez que dans la moitié des sujets avec un test "+" au cours du diagnostic ultérieur, l'agent viral n'est pas détecté dans le sang. ELISA dans ce cas indique un contact reporté avec le VHC dans le passé, comme en témoignent les anticorps circulants.

Une étude plus précise est la réaction en chaîne de la polymérase, ou autrement la PCR. Il vous permet de déterminer la concentration de l'agent pathogène de l'ARN dans le sang. En trouvant un ensemble génétique du virus dans le matériel biologique, le médecin confirme l’hépatite C.

La PCR est attribuée au patient pour vérifier le diagnostic. Il permet d'identifier l'ARN au stade où les anticorps ne sont pas encore disponibles. Il existe plusieurs types d'études génétiques:

  1. analyse quantitative de la PCR pour l'hépatite C, qui non seulement établit la présence de l'agent pathogène dans le sang, mais fournit également des informations sur sa concentration;
  2. qualité - confirme l'infection;
  3. génotypage - vous permet de déterminer le génotype de l'agent pathogène et de sélectionner les médicaments les plus efficaces contre ce dernier.

Réaction en chaîne de la polymérase

Comme déjà mentionné, il existe plusieurs types de tests de laboratoire:

  • l'analyse qualitative indique la présence d'un agent pathogène dans le sang. Ce type de diagnostic a un certain «niveau de réponse», il n’est donc pas toujours fiable. Afin de déchiffrer correctement les résultats et d’obtenir des indicateurs réels, il est recommandé d’utiliser un système de test avec une sensibilité d’au moins 50 UI / ml pour la recherche. Le taux d'analyse est «réponse négative» ou «virus non détecté». Cela indique l'absence d'un ensemble génétique de l'agent pathogène dans le matériel à tester. Si le résultat est positif, un examen plus approfondi du patient est nécessaire.
  • L'analyse quantitative de la PCR pour l'hépatite C détermine la charge virale, c'est-à-dire la concentration de l'agent pathogène dans le sang. Le résultat de l'étude montre le nombre d'unités d'ARN dans un volume fixe de fluide biologique;

La charge virale est le dénombrement de l'ARN infectieux dans un millilitre du sang étudié. Les unités de mesure sont UI / ml; toutefois, certains laboratoires définissent «copies / ml», tout en indiquant la forme de la norme d’analyse permettant la comparaison et l’évaluation des résultats.

  • génotypage. En raison de la capacité de l'agent pathogène à modifier le choix des médicaments antiviraux efficaces, le traitement doit être basé sur son génotype. Cela dépend non seulement du résultat, mais également de la durée du traitement. Ainsi, l'hépatite VHC 1 nécessite la nomination de médicaments pour un an, mais une tendance positive n'est observée que dans 60% des cas. Quant aux deuxième et troisième génotypes, ils sont moins résistants à l'action des médicaments antiviraux, ce qui explique l'efficacité de la thérapie dépasse 85%. À la réception d'un tel résultat de l'étude - "le virus n'est pas typé", il convient de suspecter la présence d'un agent pathogène non reconnu par les systèmes de test standard.

Indications pour l'analyse

Le décodage de l'analyse quantitative de l'hépatite C est nécessaire pour:

  1. examen plus approfondi du patient lorsque des anticorps anti-VHC ont été détectés au cours de la procédure ELISA;
  2. confirmation du diagnostic;
  3. établir la charge virale lors d'une infection mixte, lorsqu'une personne est infectée par plusieurs types d'agents pathogènes;
  4. déterminer les tactiques de traitement (choix des antiviraux, leur remplacement ou l'achèvement du traitement);
  5. évaluer la dynamique de la progression de la maladie, ainsi que l'efficacité des médicaments;
  6. déterminer le stade de la pathologie (aiguë, chronique).

La PCR présente les avantages suivants:

  1. bonne sensibilité, ce qui permet de calculer même une petite quantité du virus;
  2. identification du pathogène lui-même (ARN) et non des antigènes;
  3. la spécificité de la technique - la mise en place d'un certain type d'agent pathogène;
  4. la rapidité d'obtention des résultats, car l'analyse ne nécessite pas la culture de cultures dans un milieu nutritif. La réponse est prête dans 5 heures.
  5. universalité - permet d'identifier l'ensemble génétique de divers agents pathogènes, à la fois ARN et ADN (hépatite B);
  6. détection d'infection latente.

La recherche en laboratoire permet de confirmer le diagnostic et fait partie intégrante d’un examen approfondi (analyse des symptômes cliniques, résultats des tests ELISA et biochimique).

De plus, la PCR est largement utilisée en allergologie, en génétique et pour établir le caractère de paternité.

Décodage de l'analyse quantitative du virus de l'hépatite C

L'évaluation des résultats des diagnostics de laboratoire est réalisée par un médecin en comparant les données obtenues à la norme.

Analyse qualitative et quantitative de la PCR pour l'hépatite C: négatif, positif, transcription

L'hépatite C est une maladie hépatique virale provoquée par le flavivirus HCV (du mot anglais virus de l'hépatite C), dont la structure contient une molécule d'acide ribonucléique (ARN). L'ARN porte le code génétique du virus. Sa présence permet l'analyse de la PCR pour l'hépatite C.

Le danger du VHC pour une personne réside dans le fait que la fenêtre sérologique (délai entre l’infection et l’apparition d’une réaction du système immunitaire) peut être assez longue - de plusieurs semaines à six mois.

Il ne détecte pas l'infection et ne commence pas le traitement à temps.

Selon les caractéristiques individuelles de l'organisme, le porteur du VHC peut se manifester sous forme aiguë, ainsi que sous forme de maladie chronique nécessitant un traitement long et coûteux. Lorsque des anticorps anti-VHC sont détectés, une série de tests de laboratoire est effectuée, y compris une PCR pour l'hépatite C. Ce test est effectué sur toutes les personnes chez qui des anticorps sanguins contre le VHC ont été détectés.

Qu'est-ce que l'analyse PCR?

Analyse en laboratoire de la PCR pour l'hépatite C - l'étude du matériel biologique afin de détecter la présence de flavavirus.

La réaction en chaîne de la polymérase (au sens abrégé) montre la valeur quantitative de la lésion virale du corps, ses caractéristiques qualitatives, ainsi que le génotype du virus contenant l'ARN.

La méthode et la durée du traitement, ainsi que le facteur épidémiologique (degré de risque de transmission à un autre porteur) sont déterminés sur la base de ces analyses et d'analyses complémentaires.

Qu'est-ce que l'analyse d'ARN de l'hépatite C?

La PCR de l’hépatite C est aussi appelée analyse d’ARN (ARN du VHC), car Le flavavirus contient une particule d'ARN avec une taille de virion de 30 à 60 nm. L'une des caractéristiques de ce microorganisme est sa forte propension aux mutations.

Chacune des sous-espèces (génotypes) du virus a une résistance différente, ce qui entraîne différentes méthodes de traitement et la nature du pronostic ultérieur pour le patient.

Le matériel biologique (sang veineux) est administré l'estomac vide et, en règle générale, testé par la méthode de PCR en temps réel (diagnostic en temps réel extrêmement sensible avec une limite de détection inférieure à 15 UI / ml à l'aide de systèmes automatisés fermés).

Il existe d'autres tests, par exemple COBAS AMPLICOR avec une sensibilité de 50-100 UI / ml. Pour tout test de laboratoire, le seuil de sensibilité est important, c'est-à-dire la capacité du réactif à détecter la concentration minimale de virus dans le matériel biologique.

Types d'analyse de l'hépatite C par PCR

La PCR de l'hépatite C comprend trois composants importants:

  • analyse qualitative;
  • analyse quantitative;
  • génotypage.

Ces tests vous permettent de déterminer la nature de la virémie, ainsi que les caractéristiques génétiques de l'agent pathogène. En fonction de la sensibilité du système de diagnostic, l’étude est réalisée une fois et, parfois, un deuxième test est effectué avec un réactif plus sensible pour confirmer ou affiner les résultats.

PCR de haute qualité de l'hépatite C

L'analyse qualitative de l'hépatite C par PCR est un autre nom courant pour l'analyse de la réaction en chaîne de la polymérase. La sensibilité standard du test, qui permet de détecter la présence de lésions virales, est comprise entre 10 et 500 UI / ml.

Une analyse PCR de l’hépatite C négative montre que la concentration de virus dans le sang du patient est inférieure au seuil de sensibilité du système de diagnostic.

Si la PCR de haute qualité a donné la réponse "non détectée", il est important de déterminer le seuil de sensibilité du réactif lors du traitement suivant.

Les fractions protéiques au flavavirus apparaissent beaucoup plus tard.

PCR quantitative de l'hépatite C

La PCR quantitative de l'hépatite C est un indicateur de la charge virale, qui reflète le niveau de concentration en ARN du flavavirus dans le corps. C'est un indicateur montrant combien de fragments d'ARN viral sont contenus par centimètre cube de sang. Les résultats de la PCR de l'ARN de l'hépatite C dans un test quantitatif en système conventionnel sont indiqués en unités internationales par millilitre (UI / ml) et peuvent être enregistrés de différentes manières, par exemple 1,7 million ou 1,700 000 UI / ml.

Le diagnostic quantitatif PCR de l'hépatite C est prescrit aux patients avant le début du traitement antiviral et à la 12e semaine de traitement afin d'évaluer les résultats de la méthode choisie pour traiter le VHC. La charge virale permet de déterminer trois indicateurs importants de la maladie:

  • l'infectivité, c'est-à-dire le degré de risque de transmission du virus d'un porteur à un autre (plus la concentration d'ARN de flavavirus est élevée, plus le risque d'infecter une autre personne est élevé, par exemple par contact sexuel);
  • méthode et efficacité du traitement;
  • la durée et le pronostic du traitement antiviral (plus la charge virale est élevée, plus le traitement dure longtemps).

Le diagnostic quantitatif PCR de l'hépatite C par PCR dépend du type de test de laboratoire et du seuil de sensibilité. La limite inférieure de la norme est considérée comme l'indicateur allant jusqu'à 600 000 UI / ml, la valeur moyenne se situant dans la plage de 600 000 à 700 000 UI / ml. Des résultats de 800 000 UI / ml et plus sont considérés comme des taux élevés de virus contenant l'ARN.

Génotypage

En raison de la forte activité mutationnelle du VHC dans la nature, lors du test, il est important d’identifier quel génotype du virus se trouve dans le sang du patient. Au total, 11 génotypes du virus de l'hépatite C ont été enregistrés sur la planète, comprenant de nombreuses sous-espèces (sous-types). Sur le territoire de la Fédération de Russie distribué 1,2 et 3.

L’ARN PCR de l’hépatite C avec le génotypage est une composante très importante de l’analyse, car permet au médecin de déterminer la résistance (résistance) du virus, de sélectionner les médicaments appropriés et de prescrire un traitement.

Le génotypage vous permet également de déterminer indirectement l'état du foie. Par exemple, le génotype 3 du VHC est souvent accompagné d'une stéatose, dans laquelle la graisse s'accumule dans les cellules de l'organe.

Un test sanguin de PCR pour l'hépatite C devrait donner un chiffre qui détermine le génotype. Les réponses de laboratoire peuvent indiquer «non typé», ce qui signifie qu'un virus contenu dans du sang humain n'est pas détecté par le système de test. Cela peut indiquer que le génotype n'est pas typique pour une zone géographique donnée. Dans ce cas, vous devez répéter l'analyse avec une plus grande sensibilité du système de diagnostic.

Décodage de l'analyse PCR pour l'hépatite C

Le test de déchiffrement quantitatif PCR de l'hépatite C peut être basé sur les données ci-dessus. Lors de l'obtention des résultats des tests de laboratoire, les données suivantes sont généralement écrites:

  • «Trouvé» / «non trouvé» (PCR de haute qualité pour l'hépatite C);
  • le nombre de fractions contenant l'ARN, par exemple 831 680 ME / ml (analyse PCR quantitative);
  • la figure qui détermine le génotype du VHC, par exemple - 1, 2, 3, 4;
  • Le nom du test est le plus souvent en temps réel.

Le plus important pour déchiffrer l'analyse de la PCR pour l'hépatite C est le deuxième paragraphe, qui montre la charge virale, qui détermine le pronostic, la méthode et la durée du traitement.

Si le test PCR de recherche de l'hépatite C est négatif et si le test ELISA est positif, qu'est-ce que cela signifie?

Pour déchiffrer les tests de laboratoire, il est important de contacter un hépatologue ou un spécialiste des maladies infectieuses, qui expliquera les informations obtenues en fonction du type de système de diagnostic et de son seuil de sensibilité. Dans la pratique médicale, il existe de nombreuses données de tests sanguins qui peuvent induire en erreur une personne sans formation médicale.

Par exemple, si le test de PCR de l’hépatite C est négatif et si le test ELISA est positif, il se peut qu’il n’y ait pas de VHC dans le sang du patient à l’heure actuelle, mais il souffrait auparavant d’une forme aiguë de l’hépatite C. il y a des anticorps dans le sang qui ont été produits après l'invasion du virus dans le passé. Mais dans la pratique médicale moderne, l’analyse ELISA est considérée comme insuffisamment fiable et donne souvent des résultats inhabituels. Les médecins l’utilisent donc comme test de dépistage primaire. Lors du diagnostic d'une maladie, les spécialistes sont guidés avec précision par les tests PCR.

Vidéo utile

La vidéo suivante donne une description très détaillée et intéressante de l’essence de la méthode PCR, de la manière dont l’analyse est effectuée:

Conclusion

Pour l'analyse de la PCR pour l'hépatite C, le sang veineux est généralement prélevé. Le plus souvent, il y a un double apport de matériel biologique - pour ELISA et directement pour le test PCR. Pour que les résultats des tests soient corrects, il est nécessaire de respecter les règles de base pour l'échantillonnage en laboratoire de matériel biologique:

  • le sang à analyser est donné dans la première moitié de la journée à jeun;
  • entre le repas et le sang doit prendre au moins 8 heures;
  • l'alcool et les aliments frits doivent également être exclus avant le test;
  • la veille du don de sang, il est nécessaire d'éviter un effort physique intense.

Les résultats des tests sanguins sont généralement prêts le lendemain.

Analyse PCR pour l'hépatite C

Le diagnostic de l'hépatite comprend une série de tests permettant de déterminer la présence d'un virus dans le sang. L'une des méthodes de détection d'une maladie est une méthode de recherche telle que la PCR pour l'hépatite C. En quoi consiste-t-elle, pourquoi l'analyse de la PCR pour l'hépatite est-elle aussi importante qu'elle est réalisée et déchiffrée?

C'est quoi

La réaction en chaîne de la polymérase, ou PCR, est utilisée pour diagnostiquer les ulcères gastriques, les colites et les entérites. Mais son principal avantage réside dans le fait qu’il aide à détecter dans le corps à la fois le virus de l’hépatite C et ses anticorps, qui ont la capacité de ne pas provoquer de réactions du système immunitaire en raison de leur capacité à muter.

L’étude et son essence reposent sur la création de certaines conditions dans lesquelles se produit la réaction en chaîne de l’ARN de l’hépatite. Si, par comparaison avec la séquence nucléotidique du virus de l'hépatite C, des coïncidences sont trouvées, cela indique qu'il existe des particules virales dans le sang et que des processus de désintégration se produisent dans le foie. Si la quantité de virus est inférieure à un certain niveau, un diagnostic négatif est posé et, s'il est supérieur, positif.

Il existe deux types de tests sanguins utilisant la méthode PCR pour l'hépatite: l'analyse quantitative et l'analyse qualitative.

La PCR quantitative, comme mentionné ci-dessus, détermine la concentration en ARN du virus de l'hépatite. En outre, il est en mesure de donner des informations sur l'intensité du développement de la pathologie et sur l'efficacité du traitement prescrit. Une analyse quantitative de l’hépatite C est extrêmement importante car elle fixe la résistance à l’action des médicaments antiviraux et vous permet d’ajuster le traitement.

Une fois que le patient a suivi un traitement, la PCR aide à déterminer l’ordre des rendez-vous. Dans certains cas, la nécessité d’enquêtes supplémentaires. Par exemple, si le niveau d'ALP est augmenté (mais pas plus de 2 fois en six mois) et que le transcript de l'analyse indique une charge virale supérieure à 105 UI / ml, une biopsie est prescrite au patient. Si une analyse quantitative de la PCR révèle une forte inflammation et une fibrose, on prescrit au patient un traitement par des médicaments antiviraux.

Dans les cas où un grand nombre de particules virales est associé à un taux élevé d'ALAT, le patient doit être immédiatement traité sans autre mesure de diagnostic.

Faites ce test et découvrez si vous avez des problèmes de foie.

Seuls des spécialistes qualifiés et expérimentés peuvent déchiffrer qualitativement l'analyse quantitative du sang pour le dépistage de l'hépatite, et les technologies modernes permettent de le faire avec une faible concentration du virus dans le sang.

L'analyse qualitative de la PCR vise à déterminer et à confirmer la présence réelle du virus dans le corps. Elle est réalisée lorsque des anticorps anti-hépatite sont détectés dans le sang. C'est une analyse qualitative de l'hépatite qui garantit la précision du résultat à 100% et permet de poser un diagnostic dès les premiers stades de la maladie, ce qui permet de commencer la lutte contre l'hépatite dès les premières semaines après l'infection et augmente les chances de guérison complète (dans le cas d'une maladie de type B).

Avantages de la PCR

Dans l'étude par PCR et le déchiffrement d'un test sanguin d'hépatite, vous pouvez également déterminer le génotype de l'agent pathogène. Au total, il existe 6 génotypes du virus et un grand nombre de sous-types, cependant, dans notre région, 1, 2 et 3 génotypes sont devenus courants.

Les autres avantages de ce type de diagnostic sont:

  • grande précision des indicateurs obtenus et faible probabilité d'erreur;
  • niveau élevé de sensibilité aux particules virales dans le sang;
  • la possibilité d'identifier plusieurs agents pathogènes à la fois;
  • diagnostic de microorganismes intracellulaires pathogènes à forte variabilité antigénique;
  • Travailler avec le décodage de l'analyse de l'hépatite vous permet de détecter les infections cachées actuelles

Qui est nommé

Les catégories de personnes suivantes doivent réussir l’analyse par PCR de l’hépatite:

  • les femmes enceintes;
  • personnel de santé;
  • donneurs potentiels de sang et d'organes;
  • ceux qui ont des signes caractéristiques de la maladie;
  • Personnes infectées par le VIH;
  • toxicomanes;
  • promiscuous.

Comment se déroule l'analyse et faut-il s'y préparer

Le prélèvement sanguin pour la PCR est effectué à partir d'une veine. En règle générale, cela se produit le matin avant que la personne ait mangé, car après le repas, il doit s'écouler au moins 8 heures. Dans les cas extrêmes, le sang peut être prélevé pour examen le jour ou le soir, mais le délai entre l'analyse et la prise de nourriture doit être d'au moins 5 heures.

Le facteur humain peut affecter quantitativement les résultats: leur précision diminue dans certains cas de 100% à 95%, il est donc nécessaire de préparer le don de sang à l'avance. La qualité du biomatériau à analyser sera appropriée lorsque le patient suivra les règles suivantes:

  • avant de donner du sang, vous ne pouvez boire que de l'eau propre;
  • deux jours avant l'étude, il est nécessaire de refuser les aliments frits et gras, ainsi que les boissons alcoolisées;
  • un jour avant la visite au laboratoire doit cesser de prendre des médicaments. Si cela n’est pas possible, il est impératif d’en informer le technicien de laboratoire et le médecin traitant;
  • la veille, vous devez éviter les situations stressantes et l'effort physique;
  • Les examens par ultrasons, par rayons X et par instruments ne doivent pas être effectués peu de temps avant le don de sang;
  • dans l'heure qui précède l'analyse, vous devez vous abstenir de fumer;
  • 20 minutes avant de donner du sang, il faut être distrait, se calmer et expirer.

Si un enfant de moins de 5 ans réussit l'étude, les parents doivent s'assurer qu'il boit de l'eau bouillie toutes les 10 minutes pendant une demi-heure avant de prendre le biomatériau.

Décryptage des données reçues

Le décodage de l'analyse peut être représenté par des mots (dans le cas d'une étude qualitative), par exemple, «non détecté» ou «en deçà de la plage de modifications». Dans le premier cas, cela indique que l'infection n'a pas été détectée. Dans le second cas, le virus est présent, mais en petites quantités. Cette situation nécessite une nouvelle recherche.

La charge virale est déterminée par la quantité d'ARN infectieux et est appelée UI / ml ou copies / ml.

Un indicateur normal (norme) d’une analyse quantitative de l’hépatite C se situe dans l’intervalle allant de 1,8 x 102 à 2,4 x 107 UI / ml.

La concentration de virus dans le sang peut être:

  • faible: de 600 UI / ml à 3 x 10 4 / ml;
  • milieu: de 3 x 10 4 UI / ml à 8 x 10 5 UI / ml;
  • élevé: plus de 8x10 5 UI / ml.

L'analyse quantitative et qualitative de la PCR pour l'hépatite permet de déterminer la présence du virus dans l'organisme et le niveau de sa concentration. Une réaction en chaîne multidimensionnelle est capable de diagnostiquer la maladie à ses débuts, mais pour cela, il est nécessaire que les patients contactent dès que possible les institutions médicales pour obtenir de l'aide et suivent scrupuleusement les recommandations du médecin traitant.

Etude PCR pour l'hépatite C: types, indications, transcription

L'hépatite virale C est une maladie grave qui se manifeste par des lésions du foie. Chez 80% des patients, cela devient chronique. Le virus se multiplie dans les cellules du foie - les hépatocytes - et provoque leur mort. Le tissu mort est remplacé par des foyers de tissu conjonctif, une fibrose se développe.

Au fur et à mesure que la fibrose se développe, le foie est incapable d'exercer ses fonctions, la cirrhose du foie commence, ce qui est dangereux en raison de ses complications: pression accrue dans la veine porte, saignements gastro-intestinaux, insuffisance de la coagulation sanguine, changements mentaux dus à des lésions des noyaux cérébraux.

La cause de la maladie est une infection par un virus de la famille des Flaviviridae, appartenant au type des virus à ARN. Cela signifie que le matériel génétique par lequel les protéines de l'agent pathogène sont synthétisées est codé dans la molécule d'acide ribonucléique. L'infection se produit par le sang, sexuellement et d'une femme enceinte jusqu'au fœtus. Malheureusement, un délai suffisamment long peut s'écouler entre l'infection et le début de la production d'anticorps - de deux semaines à six mois. Cela ne permet pas de déterminer l'infection par la méthode de dosage immunologique et de commencer le traitement à un stade précoce.

Qu'est-ce que l'analyse PCR?

La PCR est une méthode d'analyse moléculaire qui permet de détecter le matériel génétique de l'agent pathogène dès la première semaine après l'infection en utilisant une réaction en chaîne de la polymérase. L'étude a une spécificité et une précision élevées et permet non seulement de déterminer la présence ou l'absence du virus, mais également sa concentration et son génotype.

Pour l'étude, le sang d'un patient est prélevé dans lequel l'ARN du virus peut potentiellement être localisé. Des amorces sont ajoutées aux régions synthétisées artificiellement dans le sang du gène de petite longueur souhaité, et l’ARN polymérase est une enzyme spéciale qui augmente de façon répétée la quantité de matériel génétique de l’agent pathogène. À l'aide d'un appareil spécial, plusieurs cycles de chauffage et de refroidissement sont effectués. Ensuite, le matériel est analysé et comparé aux gènes connus du virus, sur la base desquels une conclusion est formulée à propos de la présence ou de l'absence d'infection.

Types d'analyse PCR pour l'hépatite C

Il existe trois types d'analyse PCR:

  1. Analyse qualitative de la PCR. La première étape de l'étude. Cela vous permet d'identifier le matériel génétique du virus dans le sang.

  • Analyse quantitative de la PCR. Vous permet de déterminer la charge virale - la concentration du matériel génétique de l'agent pathogène dans un millilitre de sang. Cette étude est réalisée avant le début du traitement, puis au cours de la première, quatrième, douzième et (si le cours est long) vingt-quatrième semaine de traitement pour évaluer son efficacité.

  • Génotypage L'agent causal de l'hépatite C mute souvent et rapidement. Sept variantes de ce génotype du virus ont été trouvées sur la planète. En Russie, les premier, deuxième et troisième types sont courants. La résistance au traitement de chacun des génotypes est différente. Par exemple, l'efficacité du traitement du premier type est de soixante pour cent et, pour les deuxième et troisième, elle atteint quatre-vingt-cinq. Par conséquent, afin de sélectionner les médicaments appropriés et de prescrire un traitement d'une durée suffisante, il est nécessaire de déterminer exactement le type de virus avec lequel le patient est infecté.
  • Indications pour l'analyse PCR de l'hépatite C

    L'étude PCR est prescrite dans les cas suivants:

    • contact avec une personne malade au cours de laquelle une infection pourrait survenir;
    • dosage immunoenzymatique positif;
    • signes de cirrhose: modifications de la taille du foie, hypertrophie de la rate, apparition sur l'abdomen du plexus veineux sous-cutané;
    • l'apparition de symptômes de dommages au foie: douleur à l'abdomen droit, jaunissement de la peau;
    • augmentation de l'activité de l'ALT et de l'AST dans l'analyse biochimique du sang;
    • avant de commencer le traitement pour déterminer la charge virale;
    • surveiller l'efficacité du traitement antiviral;
    • après le traitement pour contrôler la rechute;
    • en présence d'hépatite B diagnostiquée, pour exclure les dommages mixtes au foie.

    Explication des études PCR sur l'hépatite C

    Le décodage de l'analyse PCR et du dosage immunoenzymatique de l'hépatite C doit être effectué par un hépatologue ou un spécialiste des maladies infectieuses. L'analyse des résultats de la PCR est nécessaire en combinaison avec les données d'analyse biochimique du sang, de la biopsie et des ultrasons. Seul un médecin qualifié sera en mesure d'analyser les résultats de la recherche et, sur cette base, de prescrire le traitement approprié.

    Décodage de l'analyse qualitative.

    Dans le matériel biologique analysé trouvé le matériel génétique de l'agent pathogène. Infection confirmée.

    L'infection est absente ou la quantité d'ARN de l'agent pathogène est inférieure à la limite de sensibilité.

    Décodage de l'analyse quantitative.

    Taux normal pour les personnes en bonne santé. Cela signifie qu'il n'y a pas d'ARN de l'hépatite C dans le matériel étudié ou que sa concentration est inférieure au seuil de sensibilité de l'étude.

    La concentration en ARN est inférieure à la plage de quantification. Ces résultats sont interprétés très soigneusement, corrélés avec les données d’autres études, souvent ré-étudiées.

    Le niveau de charge virale à une concentration donnée est considéré comme faible. Habituellement, une diminution de la quantité de virus signifie que le traitement est efficace.

    Plus de 8 * 10 ^ 5 UI / ml

    Le niveau de charge virale à une concentration donnée est considéré comme élevé.

    Plus de 2,4 * 10 ^ 7 UI / ml

    La quantité d'ARN au-dessus de la limite supérieure de la plage de quantification. Il est impossible de tirer des conclusions sur le degré de charge virale avec ce résultat. Habituellement, dans de tels cas, le test est répété avec la dilution d'un échantillon de sang.

    Décoder le génotypage.

    ARN détecté d'un génotype spécifique

    Le virus de l'hépatite C d'un certain génotype et sous-type a été détecté dans le biomatériau. Le résultat est codé en chiffres romains et en lettres latines, par exemple - 1a, 2b. Au total, il y a sept génotypes et soixante-sept sous-types, cependant, en Russie, il n'y a que trois premiers types.

    ARN du virus de l'hépatite C détecté

    L'ARN a été trouvé dans le sang d'un génotype rare pour la Russie, qui ne peut être attribué au premier, deuxième ou troisième type. Plus de recherche est nécessaire.

    Ce résultat indique que le patient est en bonne santé ou que la quantité d'ARN de l'agent pathogène est trop petite.

    Il est possible que l'analyse PCR de l'hépatite C soit négative et que le test d'immunosorbant lié à une enzyme reconnaisse les anticorps contre le virus. Cela signifie que le patient a eu l'hépatite C aiguë et a guéri par lui-même. Environ vingt cas d’infection entraînent une guérison spontanée si le corps du patient présente une résistance suffisante à l’infection.

    Bien que la PCR soit une analyse extrêmement précise, ses résultats peuvent être faussés dans les situations suivantes:

    • le sang a été transporté au laboratoire dans des conditions inappropriées, la température a été violée;
    • l'échantillon de biomatériau était contaminé;
    • il y avait des traces résiduelles d'héparine et d'autres anticoagulants dans le sang;
    • Les investigateurs se sont révélés être des inhibiteurs - des substances qui ralentissent ou arrêtent la réaction en chaîne de la polymérase.

    Les avantages de la PCR par rapport aux autres méthodes

    1. Diagnostic dans les premiers stades. La PCR détecte le matériel génétique de l'agent causal. En utilisant l'analyse par immunofluorescence, seules les immunoglobulines peuvent être déterminées - les substances que l'organisme produit en réponse à une infection. En cas d'infection par l'hépatite C, l'intervalle entre l'infection et le début de la réponse immunitaire peut être de plusieurs semaines et plusieurs mois. À ce stade, l'ELISA sera inefficace. La PCR donnera une réponse dans la première semaine après l'infection.

  • Faible probabilité d'erreur. Dans le matériel à l’étude, déterminez l’aire de matériel génétique qui n’est caractéristique que d’un seul type de pathogènes. Cela élimine les faux résultats. Lorsque des erreurs ELISA sont possibles, étant donné que le même type d'anticorps peut être libéré contre différents virus, ces anticorps sont appelés anticorps croisés.

  • Haute sensibilité. La PCR permet de détecter l'ARN de l'agent causal même en quantités minimes. Cela permet d'identifier les infections cachées.
  • Comment se préparer au don de sang pour les études PCR

    Pour l'analyse PCR de l'hépatite C, du sang veineux est collecté. Habituellement, deux portions de sang sont prélevées dans la veine du patient à la fois: la première est envoyée pour la PCR et la seconde par ELISA. Cela a pour but d'évaluer plus précisément le degré d'infection d'un patient par un virus et la manière dont l'immunité lutte contre ce virus.

    Habituellement, le patient est tenu de respecter les règles suivantes:

    • une prise de sang est prise le matin;
    • L'intervalle entre le dernier repas et le don de sang devrait être de huit à dix heures.
    • deux ou trois jours avant l'analyse, il est nécessaire d'abandonner les aliments frits et gras, ainsi que l'alcool;
    • pendant vingt-quatre heures avant l'analyse, le patient doit éviter tout effort physique: ne portez pas de poids, n'allez pas au gymnase ni à la piscine.

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